Direkte RT-qPCR Kit II
Kitbeskrivelse:
◮Direct RT-qPCR Kit, ved hjælp af Foreasy Reverse Transcriptase og Foreasy HS Taq DNA Polymerase udviklet af Foregene, med unik reaktionsbuffer, gør dette kit med stærk resistens og kompatibilitet, og det kan direkte teste reaktion ved at bruge Foregene Lysis-system som skabelon.Dette kit kan ansøge om udvikling af nukleinsyredetektionskit for COVID-19 og andre patogene bakterier.
Beskrivelse
Direct RT-qPCR Kit giver separat pakket RT-qPCR buffer, højeffektiv Foreasy HS Taq DNA polymeraseog Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),hvilket gør det praktisk til oprettelse af back-end-sæt og systemjustering, inden for enkel verifikation.
Direct RT-qPCR Kit, ved hjælp af Foreasy Reverse Transcriptase og Foreasy HS Taq DNA Polymerase udviklet af Foregene, med unik reaktionsbuffer, gør dette kit med stærk resistens og kompatibilitet, og det kan direkte teste reaktion ved at bruge Foregene Lysis-system som skabelon.Dette kit kan ansøge om udvikling af nukleinsyredetektionskit for COVID-19 og andre patogene bakterier.
Dette sæt kan direkte være en del af IVD-produktet, ved at bruge det nemt og hurtigt.Det kræver kun nem verifikation uden at udvikle sig igen.
specifikationer
500T, 50.000T
Sættets komponenter
| Sættets indhold (20 μL reaktionssystem) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Rverse transkriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml× 5 |
| Foreasy HS Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml× 10 |
| 2× Direkte RT-qPCRBuffer | 1 ml × 5 | 500 ml x 1 |
| Instruktion | 1 | 1 |
Betjeningstrin
A: Forbered skabelon og reagens
1. Forbered forberedt RNA-skabelon (det anbefales at bruge Foregene Total RNA Isolation Kit serie-kit til at ekstrahere og oprense RNA-skabelon) eller prøvekrakningsprodukt (det anbefales at bruge Foregene Lysis-system), specifikke primere (10 μM) og andre relevante forbrugsstoffer, instrument.
2. Læg 2× Direct RT-qPCR-buffer, RNase-fri ddH2O og 20× ROX referencefarve (hvis det er nødvendigt) i æsken med is, så disse smelter naturligt og blandes forsigtigt.
B: Forberedelse af RT-qPCR-system
Få halvdelen af volumen reaktionsbuffer i reaktionssystemet (hvis systemets volumen f.eks. er 20 μL, skal det have 10 μL 2× Direct RT-qPCR-buffer). Tiltilsvarende mængde enzym, det foreslår viM-MLV：10-30 U/20 μL reaktionssystem,TaqDNA polymerase:1-2 U/20 μL reaktionssystemdette er vores forslag, du bør teste og justere det), tilsæt RNA-skabelon, specifikke primere og prober og tilsæt RNase-fri ddH2O til 20 μL.Den specifikke fremstilling af RT-qPCR-reaktionssystem kan henvises til følgende tabel 1.
Tabel 1: Klargøring af RT-qPCR-system
| Komponent | Bind | Slutkoncentration |
| 2× Direkte RT-qPCR-buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA-polymerase | 1-2 U | |
| Fremadprimer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Probe (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Skabelon (RNA eller lysat) | X μL | |
| 20× ROX referencefarve | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Samlet volumen | 20 μL |
Bemærk: Forward Primer og Reverse Primer er specifikke primere af målgenet.Systemet af qPCR kan justeres i henhold til praktiske eksperimentelle og PCR-modeller.Vi anbefaler 400nM for den endelige koncentration af de fleste primere.Juster volumen af specifikke primere og prober i henhold til den forberedte koncentration og den anbefalede slutkoncentration.
1*: Vælg passende slutkoncentration af ROX Reference Dye i henhold til forskellige kvantitative PCR-instrumenter.Den optimale ROX-referencefarvekoncentration for almindelige kvantitative PCR-instrumenter er vist i følgende tabel:
| Kvantitative PCR-instrumenter | Slutkoncentration af ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/trin 1,etc. | 1× (tilsæt f.eks. 1μl 20×ROX referencefarve i 20 μL reaktionssystem) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P og Mx4000 osv. | 0,5× (tilsæt f.eks. 0,5 μl 20×ROX referencefarve i 20 μL reaktionssystem) |
| Roche PCR-instrument, Bio-Rad PCR-instrument, Eppendorf kvantitativt PCR-instrument osv. | Uden ROX Reference Dye |
Opbevaring og holdbarhed
Sættet skal opbevares ved -20 ± 5 ℃.Det skal straks opbevares i -20℃ termostatisk køleskab.Gyldighedsperioden er 2 år, hvis den opbevares i passende stand.
