Foreasy HS Taq DNA-polymerase
Kitbeskrivelse:
◮Høj specificitet: Enzymet med høj hot-start aktivitet.
◮Hurtig forstærkning: 10 sek/kb.
◮Høj skabelontilpasningsevne: kan bruges til effektivt at forstærke HighGCværdiogforskellige DNA-skabeloner, der er svære at amplificere.
◮Stærk troskab: Troskaben er 6 gangeof almindeligt Taq Enzyme.
Beskrivelse
Foreasy HS Taq DNA Polymerase er et nyt Taq-enzym udtrykt i Escherichia coli-teknologiske bakterier ved genrekombinationsteknologi.Efter at enzymet er behandlet med en speciel proces, er det's aktivitet inhiberes før termisk aktivering, hvorved den ikke-specifikke amplifikation forårsaget af den ikke-specifikke annealing af primere eller primer-dimere under lave temperaturforhold hæmmes.Dette produkt er velegnet til meget specifik PCR Reaction, Multiple x PCR , højt GC indhold (> 60%) ,medsekundær struktureller andrestærkt baggrundsgenomicsamplifikation og storstilet genomicsforstærkningsdetektion.Enzymet har 5' → 3' DNA-polymeraseaktivitet og 5' → 3' exonukleaseaktivitet, men ingen 3' → 5' exonukleaseaktivitet.
Sættets komponenter
| Komponent | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 ml) | 500 KU (100 ml) |
| 2× Taq-reaktionsbuffer | 25 ml × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml × 25 |
Egenskaber og fordele
- Høj specificitet: Enzymet med høj hot-start aktivitet.
- Hurtig forstærkning: 10 sek/kb.
- Høj skabelontilpasningsevne: kan bruges til effektivt at forstærke HighGCværdiogforskellige DNA-skabeloner, der er svære at amplificere.
- Stærk troskab: Troskaben er 6 gangeof almindeligt Taq Enzyme.
Kit ansøgning
- Diverse PCR/qPCR System og direkte PCR system
- PCR-amplificeret DNA-fragment
- DNA-mærke
- DNA-sekventering
- PCR plus A hale
Definition af aktivitet
1U: Den mængde enzym, der kræves for at inkorporere 10 nmol afDNAtil syre-uopløseligt stof ved hjælp af aktiveret laksesperm-DNA som skabelon/primer, 74 °C, 30 minutter.
Reaktionstilstand
| Temperatur | Reaktionstid | Cyklus tid |
| 37°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 10 sek | 40 |
| 60°C | 10 sek |
Bemærk:Til 10 µL og 20 µL systemer tilsættes et lige så stort volumen mineralolie, hvis termocykleren ikke har et varmelåg.
PCR-reaktionsbetingelser varierer afhængigt af de strukturelle betingelser for skabeloner, primere og lignende.I den specifikke operation er det nødvendigt at designe de optimale reaktionsbetingelser, herunder annealingstemperatur, forlængelsestid osv., i henhold til de specifikke betingelser såsom skabelontypen, størrelsen af målfragmentet, basesekvensen af det amplificerede fragment og GC-indholdet og -længden af primeren.
Opbevaring
-20 ± 5 °C i 2 år eller ved -80 °C til langtidsopbevaring.
Ingen forstærkningssignaler
1. Taq DNA-polymerasen i sættet mister sin aktivitet på grund af forkert opbevaring eller udløb af sættet.
Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne for sættet;gentilføj en passende mængde Taq DNA-polymerase til PCR-systemet eller køb et nyt Real Time PCR-kit til relaterede eksperimenter.
2.Der er en masse hæmmere af Taq DNA-polymerase i DNA-skabelonen.
Forslag: Rens skabelonen igen, eller reducer mængden af anvendt skabelon.
3.Mg2+-koncentrationen er ikke egnet.
Anbefaling: Mg2+ koncentrationen af den 2× Real PCR Mix, vi leverer, er 3,5 mM.For nogle specielle primere og skabeloner kan Mg2+-koncentrationen dog være højere.Derfor kan du direkte tilføje MgCl2 for at optimere Mg2+ koncentrationen.Det anbefales at øge Mg2+ 0,5mM hver gang for optimering.
4. PCR-amplifikationsbetingelserne er ikke egnede, og primersekvensen eller koncentrationen er forkert.
Forslag: bekræft rigtigheden af primersekvensen, og primeren er ikke blevet nedbrudt;hvis forstærkningssignalet ikke er godt, prøv at sænke annealingstemperaturen og juster primerkoncentrationen korrekt.
5. Mængden af skabelon er for lidt eller for meget.
Anbefaling: Udfør skabelonlineariseringsgradientfortynding, og vælg skabelonkoncentrationen med den bedste PCR-effekt til Real Time PCR-eksperiment.
NTC har for høj fluorescensværdi
1.Reagenskontamination forårsaget under drift.
Anbefaling: Udskift med nye reagenser til Real Time PCR-eksperimenter.
2. Kontaminering fandt sted under fremstillingen af PCR-reaktionssystemet.
Anbefaling: Træf nødvendige beskyttelsesforanstaltninger under driften, såsom: at bære latexhandsker, bruge en pipettespids med et filter osv.
3. Primerne nedbrydes, og nedbrydningen af primerne vil forårsage uspecifik amplifikation.
Forslag: Brug SDS-PAGE-elektroforese til at detektere, om primerne er nedbrudt, og udskift dem med nye primere til realtids-PCR-eksperimenter.
Primer dimer eller ikke-specifik amplifikation
1.Mg2+-koncentrationen er ikke egnet.
Anbefaling: Mg2+ koncentrationen af den 2× Real PCR EasyTM Mix, vi leverer, er 3,5 mM.For nogle specielle primere og skabeloner kan Mg2+-koncentrationen dog være højere.Derfor kan du direkte tilføje MgCl2 for at optimere Mg2+ koncentrationen.Det anbefales at øge Mg2+ 0,5mM hver gang for optimering.
2. PCR-udglødningstemperaturen er for lav.
Forslag: Forøg PCR-udglødningstemperaturen med 1 ℃ eller 2 ℃ hver gang.
3. PCR-produktet er for langt.
Anbefaling: Længden af Real Time PCR-produktet bør være mellem 100-150bp, ikke mere end 500bp.
4. Primerne nedbrydes, og nedbrydningen af primerne vil føre til fremkomsten af specifik amplifikation.
Forslag: Brug SDS-PAGE-elektroforese til at detektere, om primerne er nedbrudt, og udskift dem med nye primere til realtids-PCR-eksperimenter.
5.PCR-systemet er forkert, eller systemet er for lille.
Forslag: PCR-reaktionssystemet er for lille vil medføre, at detektionsnøjagtigheden falder.Det er bedst at bruge det reaktionssystem, der anbefales af det kvantitative PCR-instrument til at køre Real Time PCR-eksperimentet igen.
Dårlig repeterbarhed af kvantitative værdier
1. Instrumentet fungerer ikke.
Forslag: Der kan være fejl mellem hvert PCR-hul i instrumentet, hvilket resulterer i dårlig reproducerbarhed under temperaturstyring eller detektion.Kontroller venligst i henhold til instruktionerne for det tilsvarende instrument.
2. Prøvens renhed er ikke god.
Anbefaling: Urene prøver vil føre til dårlig reproducerbarhed af eksperimentet, hvilket inkluderer renheden af skabelonen og primerne.Det er bedst at genrense skabelonen, og primerne renses bedst ved SDS-PAGE.
3. PCR-systemets forberedelses- og lagringstid er for lang.
Forslag: Brug Real Time PCR-systemet til PCR-eksperiment umiddelbart efter forberedelse, og lad det ikke ligge for længe.
4. PCR-amplifikationsbetingelserne er ikke egnede, og primersekvensen eller koncentrationen er forkert.
Forslag: bekræft rigtigheden af primersekvensen, og primeren er ikke blevet nedbrudt;hvis forstærkningssignalet ikke er godt, prøv at sænke annealingstemperaturen og juster primerkoncentrationen korrekt.
5.PCR-systemet er forkert, eller systemet er for lille.
Forslag: PCR-reaktionssystemet er for lille vil medføre, at detektionsnøjagtigheden falder.Det er bedst at bruge det reaktionssystem, der anbefales af det kvantitative PCR-instrument til at køre Real Time PCR-eksperimentet igen.
-
Animal Tissue Direct PCR-kit (uden prøveudtagning ...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (uden prøve...
-
Animal Tissue DNA Isolation Kit DNA-ekstraktion ...
-
Animal Total RNA Isolation Kit Total RNA Extrac...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation...
-
General Plasmid Mini Kit General Plasmid DNA Ex...
