Animal Total RNA Isolation Kit Total RNA ekstraktion og rensningssæt til animalsk væv og celler
Kitbeskrivelse:
Hurtigt og effektivt ekstraherer total-RNA af høj renhed og høj kvalitet fra forskellige dyrevæv.
Ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning.Hele systemet er RNase-frit
Fjern effektivt DNA ved hjælp af DNA-Cleaning Column
Fjern DNA uden at tilføje DNase
Enkelt - alle operationer udføres ved stuetemperatur
Hurtig – betjeningen kan fuldføres på 30 minutter
Sikker - ingen organisk reagens brugt
Høj renhed—OD260/280≈1,8-2,1
Kitbeskrivelser
50 forberedelser, 200 forberedelser
Dette sæt brugerspin kolonne og formeludviklet af vores virksomhed, som kan udvinde total-RNA af høj renhed og høj kvalitet fra forskellige dyrevæv med høj effektivitet. Det giver en effektiv DNA-rensende kolonne, som nemt kan adskille og adsorbere genomisk DNA fra supernatanten og vævslysatet, enkelt og tidsbesparende;RNA-only Column kan effektivt binde RNA og kan behandles samtidigt med en unik formel Masser af prøver.
Hele systemet er RNase-frit, så det ekstraherede RNA ikke nedbrydes;Buffer RW1, Buffer RW2 buffervaskesystem, så det opnåede RNA er fri for protein-, DNA-, ion- og organisk forbindelsesforurening.
Sættets komponenter
| Animal Total RNA Isolation Kit | ||
| Sættets komponenter | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-fri ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-kun kolonne | 50 | 200 |
| DNA-rensningssøjle | 50 | 200 |
| Instruktionsmanual | 1 styk | 1 styk |
Produkt information
| Format | Spin kolonne | Oprensningskomponent | Foregene kolonne, reagens |
| Strøm | 1-24 prøver | Tid pr. forberedelse | ~30 min (24 prøver) |
| Centrifuger | Skrivebordscentrifuge | Pyrolyseseparation | Centrifugal adskillelse |
| Prøve | Animalsk væv;celle | Prøvemængde | Væv: 10-20 mg;Celle:(1-5)×106 |
| Elueringsvolumen | 50-200 μL | Maksimal læssevolumen | 850 μL |
Egenskaber og fordele
■ Ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning;hele systemet er RNase-frit
■ Fjern effektivt DNA ved hjælp af DNA-rensningssøjle
■ Fjern DNA uden at tilføje DNase
■ Simpel-alle operationer udføres ved stuetemperatur
■ Hurtig drift kan gennemføres på 30 minutter
■ Sikker - ingen organisk reagens påkrævet
■ Høj renhed -OD260/280≈1,8-2,1
Kit ansøgning
Det er velegnet til ekstraktion og oprensning af totalt RNA fra en række friske eller frosne dyrevæv eller dyrkede celler.
Produktparametre
■ Nedstrøms applikationer: førstestrengs cDNA-syntese, RT-PCR, molekylær kloning, Northern Blot osv.
■ Prøver: dyrevæv, dyrkede celler
■ Dosering: Væv 10-20mg, celler(2-5)×106
■ Maksimal DNA-bindingskapacitet for oprensningskolonnen: 80 μg
■ Elueringsvolumen: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNA Isolation Kit behandlet 20mg
Friske museprøver, tag 5% oprenset total RNA 1% agar
Glycogel elektroforese
1: Milt 2: Nyre
3: Lever 4: Hjerte
Opbevaring og holdbarhed
Sættet kan opbevares i 24 måneder ved stuetemperatur (15–25 ℃) eller 2–8 ℃ i længere tid.Buffer RL1 kan opbevares ved 4 ℃ i 1 måned efter tilsætning af β-mercaptoethanol (valgfrit).
Citerede artikler
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-ladede lipid-lignende nanopartikler til leverbaseredigering via optimering af centralt kompositdesign.Adv.Funktion.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Spontan apoptose af celler i terapeutisk stamcellepræparation udøver immunmodulerende virkninger gennem frigivelse af phosphatidylserin.Signal Transduct Target Ther.2021 Jul 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-methylguanosin tRNA modifikation øger onkogen mRNA translation og fremmer intrahepatisk cholangiocarcinom progression.Mol Cell.2021 29. juli:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-medieret m6A-modifikation letter leverregenerering ved at opretholde endoplasmatisk retikulum-homeostase.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA isoaltion kits til andre eksempelkilderer ledig:
Celle, plante, viral, blod osv.
RNA ekstraheres ikke, eller RNA-udbyttet er lavt
Der er ofte en række forskellige faktorer, der påvirker restitutionseffektiviteten, såsom: vævsprøve-RNA-indhold, driftsmetode, elueringsvolumen osv.
1. Isbad eller kryogen (4 °C) centrifugering blev udført under drift.
Anbefaling: Kør ved stuetemperatur (15-25 °C) gennem hele processen, isbad ikke og centrifuger ved lave temperaturer.
2. Forkert prøvekonservering eller for lang prøveopbevaringstid.
Anbefaling: Opbevar prøver ved -80 °C eller frys i flydende nitrogen og undgå gentagen fryse-optøning;prøv at bruge frisk væv eller dyrkede celler til RNA-ekstraktion.
3. Utilstrækkelig prøvelysering.
Anbefaling: Ved homogenisering af væv skal det sikres, at vævet er tilstrækkeligt homogeniseret, og at vævscellerne er tilstrækkeligt opdelt til at forklare frigivelsen af RNA.
4. Eluenten er ikke tilsat korrekt.
Anbefaling: Bekræft, at RNase-Free ddH2O tilsættes dråbevis til midten af rensesøjlemembranen.
5. Det korrekte volumen af absolut ethanol blev ikke tilsat til buffer RL2 eller buffer RW2.
Anbefaling: Følg instruktionerne, tilsæt den korrekte mængde absolut ethanol til Buffer RL2 og Buffer RW2 og bland godt, før sættet tages i brug.
6. Vævsprøvedosering er ikke passende.
Anbefaling: Brug 10-20 mg væv eller (1-5) × 106celler pr. 500 μl buffer RL1, da overdreven vævsanvendelse kan resultere i reduceret RNA-ekstraktion.
7. Ukorrekt elueringsvolumen eller ufuldstændig eluering.
Anbefaling: Rensningskolonnens elueringsvolumen er 50-200 μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det at forlænge stuetemperaturplaceringstiden efter tilsætning af forvarmet RNase-fri ddH2O, fx i 5-10 min.
8. Oprensningssøjlen har ethanolrest efter buffer RW2-vask.
Anbefaling: Hvis der er ethanolrester efter vask med buffer RW2, centrifugering af tomme rør i 1 min., kan tiden for centrifugering af tomme rør øges til 2 minutter, eller rensekolonnen kan placeres ved stuetemperatur i 5 minutter for at fjerne den resterende ethanol tilstrækkeligt.
Oprenset RNA nedbrydes
Kvaliteten af det oprensede RNA er relateret til faktorer såsom bevarelse af prøven, RNase-kontamination og manipulation osv.
1. Vævsprøver opbevares ikke i tide.
Anbefaling: Hvis vævsprøver eller celler ikke bruges rettidigt efter indsamling, skal de straks kryoopbevares ved -80 °C eller flydende nitrogen.For at ekstrahere RNA skal du bruge en nyudtaget vævs- eller celleprøve, når det er muligt.
2. Gentagen fryse-optøning af vævsprøver.
Anbefaling: Når du opbevarer vævsprøver, er det bedst at skære dem i små stykker til konservering, og fjerne et af stykkerne, når du bruger dem for at undgå gentagen fryse-optøning af prøven og nedbrydning af RNA.
3. RNase indføres eller ikke bærer engangshandsker, masker osv. under operationen.
Anbefaling: RNA-ekstraktionsforsøg udføres bedst i separate RNA-manipulationsrum, og bordet ryddes inden eksperimentet.
Bær engangshandsker og -masker under eksperimentet for at minimere RNA-nedbrydning forårsaget af introduktionen af RNase.
4. Reagenser er kontamineret med RNase under brug.
Anbefaling: Udskift med et nyt Animal Total RNA Isolation Kit til relaterede eksperimenter.
5. Centrifugerørene, spidserne osv., der anvendes til RNA-manipulation, er kontamineret med RNase.
Anbefaling: Bekræft, at de centrifugerør, spidser, pipetter osv., der bruges til RNA-ekstraktion, alle er RNase-frie.
Oprenset opnået RNA påvirker nedstrøms eksperimenter
RNA oprenset af rensningssøjlen, hvis saltioner, proteinindhold er for stort, vil påvirke nedstrømseksperimentet, såsom: omvendt transkription, Northern Blot et al.
1. Det eluerede RNA har saltionrester.
Anbefaling: Bekræft, at den korrekte mængde ethanol er blevet tilsat til buffer RW2, og udfør 2 rensningssøjlevaske ved den centrifugalhastighed, der er angivet for drift;hvis der er nogen saltionrester, skal du lade rensekolonnen stå til buffer RW2 i 5 minutter ved stuetemperatur og udføre centrifugering for at maksimere fjernelse af saltkontamination.
2. Ethanolrest i elueret RNA.
Anbefaling: Bekræft, at efter vask af buffer RW2 skal du udføre centrifugeringsoperationen med tomme rør ved den centrifugeringshastighed, der er angivet for drift, øge tiden for centrifugeringen af tomme rør til 2 minutter, hvis der stadig er ethanolrester, eller lade den stå ved stuetemperatur i 5 minutter efter centrifugeringen af tomme rør for at maksimere fjernelse af ethanolrester.
