Plant Total RNA Isolation Kit Total RNA Purificaiton Kit til plante med lavt indhold af polysaccharider og polyphenoler
specifikationer
50 forberedelser, 200 forberedelser
Sættet bruger spin-søjlen og formlen udviklet af Foregene, som effektivt kan udvinde total-RNA af høj renhed og høj kvalitet fra forskellige plantevæv med lavt indhold af polysaccharider og polyphenoler.Til planteprøver med højt indhold af polysaccharider eller polyphenoler anbefales det at bruge Plant Total RNA Isolation Plus Kit for at få bedre RNA-ekstraktionsresultater.Sættet indeholder DNA-rensningssøjlen, der nemt kan fjerne genomisk DNA fra supernatanten og vævslysatet.RNA-kun kolonne kan effektivt binde RNA.Sættet kan behandle et stort antal prøver på samme tid.
Hele systemet indeholder ikke RNase, så det oprensede RNA vil ikke blive nedbrudt.Buffer PRW1 og Buffer PRW2 kan sikre, at det opnåede RNA ikke er forurenet af protein, DNA, ioner og organiske forbindelser.
Sættets komponenter
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-fri ddH2O, DNA-rensningssøjle |
| RNA-Kun kolonne |
| Instruktioner |
Egenskaber og fordele
■ Drift ved stuetemperatur (15-25℃) gennem hele processen uden isbad og lavtemperaturcentrifugering.
■ Komplet sæt RNase-fri, ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning.
■ DNA-Cleaning Column binder sig specifikt til DNA, så sættet kan fjerne genomisk DNA-kontamination uden at tilføje DNase.
■ Højt RNA-udbytte: Kun RNA-kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA.
■ Hurtig hastighed: nem at betjene og kan gennemføres inden for 30 minutter.
■ Sikkerhed: der kræves ingen organisk reagens.
■ Høj kvalitet: De oprensede RNA-fragmenter er af høj renhed, fri for protein og andre urenheder og kan opfylde forskellige nedstrøms eksperimentelle applikationer.
Kit ansøgning
Det er velegnet til ekstraktion og oprensning af totalt RNA fra friske eller frosne plantevævsprøver (især frisk plantebladvæv) med lavt indhold af polysaccharid og polyphenol.
Workflow
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus behandlede 50 mg friske blade af polysaccharider og polyphenoler, og 5 % oprenset RNA blev testet ved elektroforese.
1: Banan
2: Ginkgo
3: Bomuld
4: Granatæble
Opbevaring og holdbarhed
Sættet kan opbevares i 12 måneder ved stuetemperatur (15–25 ℃) i tørt miljø og 2–8 ℃ i længere tid (24 måneder).
Buffer PSL1 kan opbevares ved 4 ℃ i 1 måned efter tilsætning af 2-hydroxy-1-ethanethiol (valgfrit).
Vejledning til problemanalyse
Følgende analyse af de problemer, du kan støde på iAnlæg i altRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Spin-søjlen er tilstoppet
Blokering af spin-søjlen vil medføre, at RNA-udbyttet reduceres eller endda ude af stand til at blive oprenset for at opnå RNA, og kvaliteten af det opnåede RNA vil være lav.
Almindelig årsagsanalyse:
1. Prøven er ikke ødelagt fuldstændigt.
Ufuldstændig prøvefragmentering kan blokere DNA-rensningssøjlen, hvilket også kan påvirke RNA-udbytte og -kvalitet.Vi anbefaler, at du, når du udfører prøvefragmentering, hurtigt maler tilstrækkelige mængder flydende nitrogen ind for at bryde vævene, såsom cellevægge og cellemembraner i prøverne, så meget som muligt.Til planteprøver af polyphenolpolysaccharider anbefaler vi, at du bruger Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Sug den isolerede DNA-rensningssøjle-supernatant, aspirér den mulige celleaffaldspellet.
Aspireret celleaffaldspellet kan tilstoppe kolonnen med kun RNA under RNA-adsorptionsprocedurer (se trin 5 i proceduren, trin 6 i polysaccharid-polyphenol-proceduren).Vi anbefaler, at der skal udvises forsigtighed ved aspiration af denne supernatant for at undgå, at cellerester aspireres.
3. Den oprindelige prøvemængde er for stor.
Overdreven prøvebrug vil resultere i ufuldstændig prøvefragmentering eller ufuldstændig lysis af celler med buffer PRL1 eller buffer PSL1, hvilket resulterer i en tilstoppet oprensningssøjle til oprensningsoperationer.Plant Total RNA Isolation Kit har et indledende maksimum på 50 mg pr. enkelt oprensning af en betjent prøve.For planteprøver af polyphenolpolysaccharider anbefaler vi, at du prøver Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Centrifugens temperatur er for lav.
Hel RNA-isolering og oprensning undtagen flydende nitrogenafbrydelse af prøvevæv udføres alle trin ved stuetemperatur (20-25 °C).Nogle lavtemperaturcentrifuger har temperaturer under 20 °C, hvilket kan forårsage blokeringer i DNA-rengøringssøjlen og/eller RNA-only kolonnen.Hvis dette sker, skal du indstille centrifugetemperaturen til 20-25 °C og forvarme lysisblandingen og/eller tilsætning af ethanolseparationssupernatant til 37 °C.
Intet RNA ekstraheret eller RNA-udbyttet er lavt
Der er normalt mange faktorer, der påvirker genvindingseffektiviteten, såsom: prøve-RNA-indhold, operationsmetode, elueringsvolumen osv.
Analyse af almindelige årsager som nedenfor:
1. Et isbad eller lav temperatur (4°C) centrifugering blev udført under operationen.
Forslag: Kør ved stuetemperatur (15-25°C) under hele processen, undlad at lave isbad og lavtemperaturcentrifugering.
2.RNA'et er blevet nedbrudt på grund af forkert konservering af prøven eller langtidskonservering af prøven.
Anbefaling: Frisk indsamlede prøver skal hurtigt fryses i flydende nitrogen og derefter opbevares ved -80°C i lang tid, undgå gentagen frysning og optøning af prøver;eller læg straks prøverne i blød i RNA-stabilisator RNAlater-opløsning (dyreprøver).
3.Utilstrækkelig prøvefragmentering og lysis fører til blokering af oprensningssøjlen.
Forslag: Når vævet slibes, skal du sørge for, at vævet er tilstrækkeligt formalet, og hurtigt overføre det til den præparerede buffer PSL1 (bekræft, at den korrekte andel af β-ME er blevet tilføjet, se trin 1 i proceduren).
4. Eluenten blev tilsat forkert.
Forslag: Sørg for, at RNase-Free ddH2O dryppes ind i midten af rensesøjlens membran.
5. Det korrekte volumen af absolut ethanol blev ikke tilsat buffer PSL2 eller Buffer PRW2.
Forslag: Følg venligst instruktionerne, tilsæt den korrekte mængde absolut ethanol til Buffer PSL2 og Buffer PRW2 og bland godt, før sættet bruges.
6. Mængden af vævsprøve er uhensigtsmæssig.
Forslag: Brug 50 mg væv pr. 500 μl buffer PSL1.Brug af for meget væv vil reducere mængden af ekstraheret RNA, og renheden af det resulterende RNA vil også blive reduceret.Vi anbefaler kraftigt, at den indledende prøvedosis ikke bør overstige 50 mg pr. RNA-ekstraktionsoperation.
7. Uhensigtsmæssig elueringsvolumen eller ufuldstændig eluering.
Forslag: Rensningskolonnens eluentvolumen er 50-200 μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det at forlænge tiden ved stuetemperatur efter tilsætning af forvarmet RNase-fri ddH2O, såsom 5-10 min.
8. Oprensningssøjlen har ethanolrest efter vask med buffer PRW2.
Forslag: Hvis det tomme rør centrifugeres i 1 min, og der stadig er ethanol tilbage efter vask i Buffer PRW2, kan du øge tiden for det tomme rørs centrifugering til 2 min, eller placere rensesøjlen ved stuetemperatur i 5 min for helt at fjerne den resterende ethanol.
9. Sættet blev brugt forkert.
Forslag: For planteprøver af polyphenoliske polysaccharider kan brug af almindelige kits såsom Plant Total RNA Isolation Kit muligvis ikke opnå ideelle RNA-prøver.Vi anbefaler dig at bruge Plant Total RNA IsolationKit Plus, som er specielt designet til polyphenoliske polysaccharid planteprøver.Et sæt specielt udviklet til at udvinde RNA fra polyphenol og polysaccharid planteprøver.
OD260/OD280-værdien er lav
RNA-eluering med ddH2O og bruges til spektrofotometeraflæsninger resulterer i lave OD260/OD280-værdier.Vi anbefaler at bruge 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (i stedet for RNase-fri ddH2O for at eluere RNA) for at opnå relativt korrekte OD260/OD280-værdier, se "RNA-koncentrations- og oprensningsassays" på side 19.
Det oprensede RNA nedbrydes
Kvaliteten af oprenset RNA er relateret til faktorer som prøvekonservering, RNase-kontamination og manipulation.
Analyse af almindelige årsager:
1. Vævsprøver blev ikke opbevaret i tide efter indsamling.
Anbefaling: Hvis vævsprøverne ikke bruges i tide efter indsamling, skal du opbevare dem i flydende nitrogen ved lav temperatur med det samme eller overføre dem til -80°C til langtidsopbevaring efter hurtig nedfrysning i flydende nitrogen, eller straks nedsænke prøverne i RNA-stabilisator RNAlater-opløsning (dyreprøver).For RNA-ekstraktion, prøv at bruge frisk indsamlede vævsprøver.
2. Gentagen nedfrysning og optøning af vævsprøver.
Forslag: Når du opbevarer vævsprøver, er det bedst at skære dem i små stykker til konservering, og tage en del af dem ud, når du bruger dem for at undgå nedbrydning af RNA forårsaget af gentagen frysning og optøning af prøverne.
3.RNase indføres i operationsstuen eller ikke-bårne engangshandsker, masker mv.
Forslag: RNA-ekstraktionsforsøg udføres bedst i separate RNA-operationer, og laboratoriebordet bør rengøres før forsøget, og engangshandsker og -masker bør bæres under forsøget for at undgå RNA-nedbrydning forårsaget af introduktion af RNase i størst muligt omfang.
4.Reagenset er kontamineret med RNase under brug.
Forslag: Udskift med en ny serie af plante-total-RNA-ekstraktionssæt til relaterede eksperimenter.
5. Centrifugerørene og pipettespidserne, der bruges til RNA-manipulation, er kontamineret med RNase.
Forslag: Sørg for, at de centrifugerør, pipettespidser, pipetter osv., der bruges til RNA-ekstraktion, alle er RNase-frie.
Instruktionsmanualer:
