Cell Direct RT qPCR-kit — SYBR GREEN I Direkte cellelyse Celleklar Et-trins qRT-PCR-sæt
Beskrivelser
Dette kit bruger et unikt lyseringsbuffersystem, der hurtigt kan frigive RNA fra dyrkede celleprøver til RT-qPCR-reaktioner, og derved eliminere den tidskrævende og besværlige RNA-oprensningsproces.RNA-skabelonen kan fås på kun 7 minutter.Den 5×Direkte RT Mix og 2×Direkte qPCR Mix-SYBR-reagenser leveret af sættet kan hurtigt og effektivt opnå kvantitative PCR-resultater i realtid.
5×Direkte RT Mix og 2×Direct qPCR Mix-SYBR har stærk inhibitortolerance, og lysatet af prøverne kan bruges som skabelon for RT-qPCR direkte.Dette sæt indeholder den unikke RNA højaffinitet Foregene revers transkriptase og Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, reaktionsbuffer, PCR-optimering og stabilisator.
specifikationer
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Sættets komponenter
| Del I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Del II | DNA viskelæder |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX referencefarve | |
| RNase-fri ddH2O | |
| Instruktioner | |
Egenskaber og fordele
■Enkel og effektiv: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prøver opnås på kun 7 minutter.
■ Prøvebehovet er lille, så lavt som 10 celler kan testes.
■ Høj gennemstrømning: den kan hurtigt detektere RNA i celler dyrket i 384, 96, 24, 12, 6-brønds plader.
■ DNA Eraser kan hurtigt fjerne frigivne genomer, i høj grad reducere indvirkningen på efterfølgende eksperimentelle resultater.
■ Optimeret RT- og qPCR-system gør to-trins RT-PCR revers transkription mere effektiv og PCR mere specifik og mere modstandsdygtig over for RT-qPCR-reaktionshæmmere.
Kit ansøgning
Anvendelsesområde: dyrkede celler.
- RNA frigivet ved prøvelysis: gælder kun for RT-qPCR-skabelonen i dette kit.
- Sættet kan bruges til følgende formål: genekspressionsanalyse, verifikation af siRNA-medieret gendæmpende effekt, lægemiddelscreening mv.
Diagram
Opbevaring og holdbarhed
Del I af dette sæt skal opbevares ved 4 ℃;Del II skal opbevares ved -20℃.
Foregene Protease Plus II bør opbevares ved 4℃, må ikke fryses ved -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR bør opbevares ved -20℃i mørket;hvis den bruges ofte, kan den også opbevares ved 4℃ til korttidsopbevaring (brug op inden for 10 dage).
Real Time PCR primer design principper
Forward Primer og Reverse Primer
For Real Time PCR er primerdesign meget vigtigt.Primere er relateret til specificiteten og effektiviteten af PCR-amplifikation og kan designes med henvisning til følgende principper:
Primerlængde: 18-30bp.
GC indhold: 40-60%.
Tm-værdi: Primer-designsoftware, såsom Primer 5, kan give primerens Tm-værdi.Tm-værdierne for opstrøms- og nedstrømsprimerne skal være så tæt som muligt.Tm-beregningsformlen kan også bruges: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ved udførelse af PCR vælges generelt en temperatur under primerens Tm-værdi på 5 °C som annealingstemperatur (den tilsvarende stigning i annealingstemperaturen kan øge specificiteten af PCR-reaktionen).
Primere og PCR-produkter:
Designprimer PCR-amplifikationsproduktlængden er fortrinsvis 100-150 bp.
Designprimere i skabelonens sekundære strukturelle område bør undgås så meget som muligt.
Undgå dannelsen af 2 eller flere komplementære baser mellem 3'-enderne af opstrøms- og nedstrømsprimere.
Primer 3′ terminal base kan ikke være til stede med 3 yderligere på hinanden følgende G eller C.
Primerne i sig selv kan ikke have komplementære strukturer, ellers vil der blive dannet en hårnålestruktur, som påvirker PCR-amplifikation.
ATCG bør fordeles så jævnt som muligt i primersekvensen, og den 3′ terminale base bør undgås som T.
Appendiks 1：Cell Direct RT-qPCR Kit komponenttilskudspakke
1.Cellelyseopløsning
|
| |||
| Sættets komponenter (24-brønds lysesystem/brønd) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| En deljeg | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| En delII | DNA viskelæder | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Sættets komponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Sættets komponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX referencefarve | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruktionsmanualer:
