Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Et-trins qRT-PCR Kits Probe
Beskrivelser
Dette produkt bruger et unikt lyseringsbuffersystem til hurtigt at frigive RNA fra dyrkede celleprøver til RT-qPCR-reaktioner, hvilket eliminerer den tidskrævende og besværlige RNA-oprensningsproces, og kun 7 minutter til at opnå den nødvendige RNA-skabelon, med 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman leveret af kittet kan hurtigt og effektivt opnå PCR-resultater i realtid.
5× Direct RT Mix og 2× Direct qPCR Mix-Taqman har stærk inhibitortolerance og kan udføre effektiv reversering og specifik amplifikation ved at bruge lysatet af prøven, der skal måles som en skabelon.Reagenset indeholder Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA-polymerase, dNTP'er, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer og Stabilizer, som kan bruges sammen med lyseringsbuffer til hurtigt og nemt at detektere prøver og har karakteristika af høj sensitivitet, specificitet og stabilitet.
specifikationer
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Sættets komponenter
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Sættets komponenter 20μl qPCR-reaktionssystem | DRT-01021 | DRT-01022 | Bemærk | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
En del I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Cellelyse |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
En del II | DNA viskelæder | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX referencefarve | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Instruktionsmanual | 1 styk | 1 styk | ||
*:Cellelysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman kan købes separat
Egenskaber og fordele
■Enkel og effektiv: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prøver opnås på kun 7 minutter.
■ Prøvebehovet er lille, så lavt som 10 celler kan testes.
■ Høj gennemstrømning: den kan hurtigt detektere RNA i celler dyrket i 384, 96, 24, 12, 6-brønds plader.
■ DNA Eraser kan hurtigt fjerne frigivne genomer, i høj grad reducere indvirkningen på efterfølgende eksperimentelle resultater.
■ Optimeret RT- og qPCR-system gør to-trins RT-PCR revers transkription mere effektiv og PCR mere specifik og mere modstandsdygtig over for RT-qPCR-reaktionshæmmere.
Kit ansøgning
Anvendelsesområde: dyrkede celler.
- RNA frigivet ved prøvelysis: gælder kun for RT-qPCR-skabelonen i dette kit.
- Sættet kan bruges til følgende formål: genekspressionsanalyse, verifikation af siRNA-medieret gendæmpende effekt, lægemiddelscreening mv.
Opbevaring og holdbarhed
Del I af dette sæt skal opbevares ved 4℃;Del II skal opbevares ved -20℃.
Foregene Protease Plus II bør opbevares ved 4℃, må ikke fryses ved -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman bør opbevares ved -20℃i mørket;hvis den bruges ofte, kan den også opbevares ved 4℃ til korttidsopbevaring (brug op inden for 10 dage).
Real Time PCR primer design principper
Forward Primer og Reverse Primer
For Real Time PCR er primerdesign meget vigtigt.Primere er relateret til specificiteten og effektiviteten af PCR-amplifikation og kan designes med henvisning til følgende principper:
- Primerlængde: 18-30bp.
- GC indhold: 40-60%.
- Tm-værdi: Primer-designsoftware, såsom Primer 5, kan give primerens Tm-værdi.Tm-værdierne for opstrøms- og nedstrømsprimerne skal være så tæt som muligt.Tm-beregningsformlen kan også bruges: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ved udførelse af PCR vælges generelt en temperatur under primerens Tm-værdi på 5 °C som annealingstemperatur (den tilsvarende stigning i annealingstemperaturen kan øge specificiteten af PCR-reaktionen).
- Primere og PCR-produkter:
- Designprimer PCR-amplifikationsproduktlængden er fortrinsvis 100-150 bp.
- Designprimere i skabelonens sekundære strukturelle område bør undgås så meget som muligt.
- Undgå dannelsen af 2 eller flere komplementære baser mellem 3'-enderne af opstrøms- og nedstrømsprimere.
- Primer 3′ terminal base kan ikke være til stede med 3 yderligere på hinanden følgende G eller C.
- Primerne i sig selv kan ikke have komplementære strukturer, ellers vil der blive dannet en hårnålestruktur, som påvirker PCR-amplifikation.
- ATCG bør fordeles så jævnt som muligt i primersekvensen, og den 3′ terminale base bør undgås som T.
bilag1: Celler direkteRT-qPCR Kit komponentt tillægspakke
1. Cellelyseopløsning
| Cellelyseopløsning | |||
| Sættets komponenter (24-brønds lysesystem/brønd) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| En deljeg | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| En delII | DNA viskelæder | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Sættets komponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-blanding | ||
| Sættets komponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referencefarve | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruktionsmanualer:
