Real Time PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Kitbeskrivelse:
◮Enkel—2× PCR-mix for at reducere eksperimentel fejl og driftstid
◮Specifik-optimeret buffer og hot-start Taq enzym kan forhindre uspecifik amplifikation og primer dimer dannelse
◮Høj følsomhed – kan registrere lave kopier af skabelonen
◮God alsidighed – kompatibel med de fleste kvantitative PCR-instrumenter i realtid
Kitbeskrivelser
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman leveret af Real Time PCR EasyTM-Taqman kit er et nyt premix-system, der bruger specifikke fluorescerende prober til Real Time PCR-amplifikationsreaktioner, hvilket i høj grad kan forbedre produktspecificiteten og reaktionsfølsomheden.ROX leveres som intern kontrolfarve.
2X Real PCR NemTMMix-Taqman indeholder Foregenes unikke hot-start Taq DNA Polymerase.Sammenlignet med almindelige Taq-enzymer har det fordelene ved høj amplifikationseffektivitet, stærk specifik amplifikationsevne og lav mismatch-rate.Det kan reducere uspecifik amplifikation og forbedre nøjagtigheden af PCR.
specifikationer
| Real Time PCR NemTM-Taqman | ||||
| Sættets sammensætning (20μl system) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2×Ægte PCRLetTMBlande-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
| 20×ROX referencefarve | 200 μl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
| DNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
| Ikonstruktion | 1 | 1 | 1 | 1 |
Egenskaber og fordele
■ Simple—2X PCR Mix for at reducere eksperimentel fejl og driftstid
■ Specifik – optimeret buffer og hot-start Taq enzym kan forhindre uspecifik amplifikation og primer dimer dannelse
■ Høj følsomhed – kan registrere lave kopier af skabelonen
■ God alsidighed – kompatibel med de fleste kvantitative realtids-PCR-instrumenter
Kit ansøgning
qPCR-analyse
Workflow
Grafisk
Opbevaring og holdbarhed
Dette sæt skal opbevares væk fra lys og skal opbevares ved -20 ℃.Hvis den bruges ofte, kan den også opbevares ved 4 ℃ i en kort periode (10 dage).
Ingen forstærkningssignaler
1. Taq DNA-polymerasen i sættet mister sin aktivitet på grund af forkert opbevaring eller udløb af sættet.
Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne for sættet;gentilføj en passende mængde Taq DNA-polymerase til PCR-systemet eller køb et nyt Real Time PCR-kit til relaterede eksperimenter.
2.Der er en masse hæmmere af Taq DNA-polymerase i DNA-skabelonen.
Forslag: Rens skabelonen igen, eller reducer mængden af anvendt skabelon.
3.Mg2+-koncentrationen er ikke egnet.
Anbefaling: Mg2+ koncentrationen af den 2× Real PCR Mix, vi leverer, er 3,5 mM.For nogle specielle primere og skabeloner kan Mg2+-koncentrationen dog være højere.Derfor kan du direkte tilføje MgCl2 for at optimere Mg2+ koncentrationen.Det anbefales at øge Mg2+ 0,5mM hver gang for optimering.
4. PCR-amplifikationsbetingelserne er ikke egnede, og primersekvensen eller koncentrationen er forkert.
Forslag: bekræft rigtigheden af primersekvensen, og primeren er ikke blevet nedbrudt;hvis forstærkningssignalet ikke er godt, prøv at sænke annealingstemperaturen og juster primerkoncentrationen korrekt.
5. Mængden af skabelon er for lidt eller for meget.
Anbefaling: Udfør skabelonlineariseringsgradientfortynding, og vælg skabelonkoncentrationen med den bedste PCR-effekt til Real Time PCR-eksperiment.
NTC har for høj fluorescensværdi
1.Reagenskontamination forårsaget under drift.
Anbefaling: Udskift med nye reagenser til Real Time PCR-eksperimenter.
2. Kontaminering fandt sted under fremstillingen af PCR-reaktionssystemet.
Anbefaling: Træf nødvendige beskyttelsesforanstaltninger under driften, såsom: at bære latexhandsker, bruge en pipettespids med et filter osv.
3. Primerne nedbrydes, og nedbrydningen af primerne vil forårsage uspecifik amplifikation.
Forslag: Brug SDS-PAGE-elektroforese til at detektere, om primerne er nedbrudt, og udskift dem med nye primere til realtids-PCR-eksperimenter.
Primer dimer eller ikke-specifik amplifikation
1.Mg2+-koncentrationen er ikke egnet.
Anbefaling: Mg2+ koncentrationen af den 2× Real PCR EasyTM Mix, vi leverer, er 3,5 mM.For nogle specielle primere og skabeloner kan Mg2+-koncentrationen dog være højere.Derfor kan du direkte tilføje MgCl2 for at optimere Mg2+ koncentrationen.Det anbefales at øge Mg2+ 0,5mM hver gang for optimering.
2. PCR-udglødningstemperaturen er for lav.
Forslag: Forøg PCR-udglødningstemperaturen med 1 ℃ eller 2 ℃ hver gang.
3. PCR-produktet er for langt.
Anbefaling: Længden af Real Time PCR-produktet bør være mellem 100-150bp, ikke mere end 500bp.
4. Primerne nedbrydes, og nedbrydningen af primerne vil føre til fremkomsten af specifik amplifikation.
Forslag: Brug SDS-PAGE-elektroforese til at detektere, om primerne er nedbrudt, og udskift dem med nye primere til realtids-PCR-eksperimenter.
5.PCR-systemet er forkert, eller systemet er for lille.
Forslag: PCR-reaktionssystemet er for lille vil medføre, at detektionsnøjagtigheden falder.Det er bedst at bruge det reaktionssystem, der anbefales af det kvantitative PCR-instrument til at køre Real Time PCR-eksperimentet igen.
Dårlig repeterbarhed af kvantitative værdier
1. Instrumentet fungerer ikke.
Forslag: Der kan være fejl mellem hvert PCR-hul i instrumentet, hvilket resulterer i dårlig reproducerbarhed under temperaturstyring eller detektion.Kontroller venligst i henhold til instruktionerne for det tilsvarende instrument.
2. Prøvens renhed er ikke god.
Anbefaling: Urene prøver vil føre til dårlig reproducerbarhed af eksperimentet, hvilket inkluderer renheden af skabelonen og primerne.Det er bedst at genrense skabelonen, og primerne renses bedst ved SDS-PAGE.
3. PCR-systemets forberedelses- og lagringstid er for lang.
Forslag: Brug Real Time PCR-systemet til PCR-eksperiment umiddelbart efter forberedelse, og lad det ikke ligge for længe.
4. PCR-amplifikationsbetingelserne er ikke egnede, og primersekvensen eller koncentrationen er forkert.
Forslag: bekræft rigtigheden af primersekvensen, og primeren er ikke blevet nedbrudt;hvis forstærkningssignalet ikke er godt, prøv at sænke annealingstemperaturen og juster primerkoncentrationen korrekt.
5.PCR-systemet er forkert, eller systemet er for lille.
Forslag: PCR-reaktionssystemet er for lille vil medføre, at detektionsnøjagtigheden falder.Det er bedst at bruge det reaktionssystem, der anbefales af det kvantitative PCR-instrument til at køre Real Time PCR-eksperimentet igen.
-
Animal Tissue Direct PCR-kit (uden prøveudtagning ...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (uden prøve...
-
Animal Tissue DNA Isolation Kit DNA-ekstraktion ...
-
Animal Total RNA Isolation Kit Total RNA Extrac...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation...
-
General Plasmid Mini Kit General Plasmid DNA Ex...
