(96-brønds) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – Taqman
Beskrivelser
Det(96-brønd) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–Taqmangiveret unikt lyseringsbuffersystemto frigiver hurtigt RNAfra dyrkede cellerprøver til RT-qPCR-reaktioner, hvilket eliminerer det tidskrævende og besværligeRNA-oprensningsprocessen, og det tager kun 7 minutter at opnå den nødvendige RNA-skabelon.Det5× Direct RT Mixog2× Direct qPCR Mix-SYBRleveres i kassen kan hurtigt ogeffektivt opnå real-time kvantitativePCR resultater.
5× Direct RT Mix og 2× Direct qPCR Mix-Taqman har stærk inhibitortolerance og kan bruge lysatet af prøven, der skal testes, som skabelon til effektiv revers transkription og specifik amplifikation.Reagenset indeholder Foregene unik revers transkriptase med høj affinitet for RNA, samt Hot D-Taq DNA-polymerase, dNTP'er, MgCl2 , reaktionsbuffer, PCR-optimering og stabilisator, og kan bruges sammen med lyseringsbufferen til at detektere prøven hurtigt, nemt og præcist, og det har karakteristika af høj sensitivitet, stærk specificitet og god stabilitet.
Sættet er rettet mod mikrosystemlyse af 96-brønds dyrkede celler og har god ensartethed og konsistens;kit-komponenterne giver 96 lysereaktioner, 96 revers transkriptionsreaktioner og 96×2 qPCR-reaktioner, som kan opfylde 96-brønds cellepladen til engangsbrug, hvilket undgår forurening forårsaget af gentagen åbning, frysning og optøning af reagenser og forringelse af reagensydelse.
Sættets komponenter
| Sættets sammensætning ( 50 μL lysesystem/20 μLRT reaktionssystem /20μL qPCR reaktionssystem) | DRT-03021 | Bemærkning | |
| 96T | |||
| En delI | BufferCL | 5 ml | CelleLysis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| En del II | DNAViskelæder | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX referencefarve | 400µL | ||
| RNase- GratisddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mårligt | 1 stykke | 1 portion | |
*: Lysereagens DNA Eraser er inkluderet i del II af sættet;Cellelysis-, RT- og qPCR-komponenter kan købes separat.
Egenskaber og fordele
■Enkel og effektiv: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prøver opnås på kun 7 minutter.
■ Prøvebehovet er lille, så lavt som 10 celler kan testes.
■ Høj gennemstrømning: den kan hurtigt detektere RNA i celler dyrket i 384, 96, 24, 12, 6-brønds plader.
■ DNA Eraser kan hurtigt fjerne frigivne genomer, i høj grad reducere indvirkningen på efterfølgende eksperimentelle resultater.
■ Optimeret RT- og qPCR-system gør to-trins RT-PCR revers transkription mere effektiv og PCR mere specifik og mere modstandsdygtig over for RT-qPCR-reaktionshæmmere.
Kit ansøgning
Anvendelsesområde: dyrkede celler.
- RNA frigivet ved prøvelysis: gælder kun for RT-qPCR-skabelonen i dette kit.
- Sættet kan bruges til følgende formål: genekspressionsanalyse, verifikation af siRNA-medieret gendæmpende effekt, lægemiddelscreening mv.
Opbevaring og holdbarhed
Del I af dette sæt skal opbevares ved 4℃;Del II skal opbevares ved -20℃.
Foregene Protease Plus II bør opbevares ved 4℃, må ikke fryses ved -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman bør opbevares ved -20℃i mørket;hvis den bruges ofte, kan den også opbevares ved 4℃ til korttidsopbevaring (brug op inden for 10 dage).
Real Time PCR primer design principper
Forward Primer og Reverse Primer
For Real Time PCR er primerdesign meget vigtigt.Primere er relateret til specificiteten og effektiviteten af PCR-amplifikation og kan designes med henvisning til følgende principper:
- Primerlængde: 18-30bp.
- GC indhold: 40-60%.
- Tm-værdi: Primer-designsoftware, såsom Primer 5, kan give primerens Tm-værdi.Tm-værdierne for opstrøms- og nedstrømsprimerne skal være så tæt som muligt.Tm-beregningsformlen kan også bruges: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ved udførelse af PCR vælges generelt en temperatur under primerens Tm-værdi på 5 °C som annealingstemperatur (den tilsvarende stigning i annealingstemperaturen kan øge specificiteten af PCR-reaktionen).
- Primere og PCR-produkter:
- Designprimer PCR-amplifikationsproduktlængden er fortrinsvis 100-150 bp.
- Designprimere i skabelonens sekundære strukturelle område bør undgås så meget som muligt.
- Undgå dannelsen af 2 eller flere komplementære baser mellem 3'-enderne af opstrøms- og nedstrømsprimere.
- Primer 3′ terminal base kan ikke være til stede med 3 yderligere på hinanden følgende G eller C.
- Primerne i sig selv kan ikke have komplementære strukturer, ellers vil der blive dannet en hårnålestruktur, som påvirker PCR-amplifikation.
- ATCG bør fordeles så jævnt som muligt i primersekvensen, og den 3′ terminale base bør undgås som T.
bilag1: Celler direkteRT-qPCR Kit komponentt tillægspakke
1. Cellelyseopløsning
| Cellelyseopløsning | |||
| Sættets komponenter (24-brønds lysesystem/brønd) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| En deljeg | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| En delII | DNA viskelæder | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Sættets komponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-blanding | ||
| Sættets komponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referencefarve | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruktionsmanualer:
