Celle Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Oprensningskit fra celle
Kitbeskrivelse:
Højt oprenset og højkvalitets total-RNA kan opnås fra forskellige dyrkede celler på 11 minutter.
RNase-fri
Betjenes ved stuetemperatur (15-25 ℃)
Med DNA-rensningssøjle
Højt RNA-udbytte
Hurtigt: Afslut ekstraktion på 11 minutter
Sikkerhed: Ingen Organisk kemikalie
Beskrivelse
Dette sæt bruger spin-søjlen og formlen udviklet af Foregene, som effektivt kan udvinde total-RNA af høj renhed og høj kvalitet fra celler dyrket i 96, 24, 12 og 6-brønds plader.
Sættet giver en effektiv DNA-rensningssøjle, som nemt kan adskille supernatanten og cellelysatet, binde og fjerne genomisk DNA.Betjeningen er enkel og tidsbesparende.
Tkolonnen med kun RNA kan effektivt binde RNA med en unik formel.Et stort antal prøver kan behandles samtidigt.
Sættets komponenter
| Sættets sammensætning | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-fri ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-Kun kolonne | 50 | 200 |
| DNA-rensningssøjle | 50 | 200 |
| Instruktion | 1 | 1 |
*Bær venligst handsker og tag beskyttelsesforanstaltninger under operationen, da buffer cRL1 og buffer RW1 indeholder irriterende kaotropiske salte.
Egenskaber og fordele
■ Hele processen drives ved stuetemperatur (15-25℃), uden isbad og lavtemperaturcentrifugering.
■ Hele sættet er RNase-frit, ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning.
■ DNA-Cleaning Column binder specifikt DNA, så sættet kan fjerne genomisk DNA-kontamination uden at tilføje yderligere DNase.
■ Højt RNA-udbytte: Kun RNA-kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA.
■ Hurtig hastighed: nem at betjene og kan gennemføres på 11 minutter.
■ Sikkerhed: Der kræves ingen organisk reagens.
■ Høj kvalitet: Det rensede RNA er af høj renhed, fri for protein og andre urenheder og kan opfylde forskellige efterfølgende eksperimenter.
Kit ansøgning
Det er velegnet til ekstraktion og oprensning af totalt RNA fra dyrkede celler i plader med 96, 24, 12 og 6 brønde.
Workflow
Diagram
Agarosegelbatteridiagrammet af Cell Total RNA Isolation Kit behandlede ovennævnte forskellige antal celler, 20μl volumen eluering, tag 2μl oprenset total RNA 1%.
Opbevaring og holdbarhed
Sættet kan opbevares i 12 måneder ved stuetemperatur (15–25 ℃) eller 2–8 ℃ i længere tid (24 måneder).
Buffer cRL1 kan opbevares ved 4 ℃ i 1 måned efter tilsætning af 2-hydroxy-1-ethanethiol (valgfrit).
RNA ekstraheres ikke, eller RNA-udbyttet er lavt
Der er ofte en række forskellige faktorer, der påvirker restitutionseffektiviteten, såsom: vævsprøve-RNA-indhold, driftsmetode, elueringsvolumen osv.
1. Isbad eller kryogen (4 °C) centrifugering blev udført under drift.
Anbefaling: Kør ved stuetemperatur (15-25 °C) gennem hele processen, isbad ikke og centrifuger ved lave temperaturer.
2. Forkert prøvekonservering eller for lang prøveopbevaringstid.
Anbefaling: Opbevar prøver ved -80 °C eller frys i flydende nitrogen og undgå gentagen fryse-optøning;prøv at bruge frisk væv eller dyrkede celler til RNA-ekstraktion.
3. Utilstrækkelig prøvelysering.
Anbefaling: Ved homogenisering af væv skal det sikres, at vævet er tilstrækkeligt homogeniseret, og at vævscellerne er tilstrækkeligt opdelt til at forklare frigivelsen af RNA.
4. Eluenten er ikke tilsat korrekt.
Anbefaling: Bekræft, at RNase-Free ddH2O tilsættes dråbevis til midten af rensesøjlemembranen.
5. Det korrekte volumen af absolut ethanol blev ikke tilsat til buffer RL2 eller buffer RW2.
Anbefaling: Følg instruktionerne, tilsæt den korrekte mængde absolut ethanol til Buffer RL2 og Buffer RW2 og bland godt, før sættet tages i brug.
6. Vævsprøvedosering er ikke passende.
Anbefaling: Brug 10-20 mg væv eller (1-5) × 106celler pr. 500 μl buffer RL1, da overdreven vævsanvendelse kan resultere i reduceret RNA-ekstraktion.
7. Ukorrekt elueringsvolumen eller ufuldstændig eluering.
Anbefaling: Rensningskolonnens elueringsvolumen er 50-200 μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det at forlænge stuetemperaturplaceringstiden efter tilsætning af forvarmet RNase-fri ddH2O, fx i 5-10 min.
8. Oprensningssøjlen har ethanolrest efter buffer RW2-vask.
Anbefaling: Hvis der er ethanolrester efter vask med buffer RW2, centrifugering af tomme rør i 1 min., kan tiden for centrifugering af tomme rør øges til 2 minutter, eller rensekolonnen kan placeres ved stuetemperatur i 5 minutter for at fjerne den resterende ethanol tilstrækkeligt.
Oprenset RNA nedbrydes
Kvaliteten af det oprensede RNA er relateret til faktorer såsom bevarelse af prøven, RNase-kontamination og manipulation osv.
1. Vævsprøver opbevares ikke i tide.
Anbefaling: Hvis vævsprøver eller celler ikke bruges rettidigt efter indsamling, skal de straks kryoopbevares ved -80 °C eller flydende nitrogen.For at ekstrahere RNA skal du bruge en nyudtaget vævs- eller celleprøve, når det er muligt.
2. Gentagen fryse-optøning af vævsprøver.
Anbefaling: Når du opbevarer vævsprøver, er det bedst at skære dem i små stykker til konservering, og fjerne et af stykkerne, når du bruger dem for at undgå gentagen fryse-optøning af prøven og nedbrydning af RNA.
3. RNase indføres eller ikke bærer engangshandsker, masker osv. under operationen.
Anbefaling: RNA-ekstraktionsforsøg udføres bedst i separate RNA-manipulationsrum, og bordet ryddes inden eksperimentet.
Bær engangshandsker og -masker under eksperimentet for at minimere RNA-nedbrydning forårsaget af introduktionen af RNase.
4. Reagenser er kontamineret med RNase under brug.
Anbefaling: Udskift med et nyt Animal Total RNA Isolation Kit til relaterede eksperimenter.
5. Centrifugerørene, spidserne osv., der anvendes til RNA-manipulation, er kontamineret med RNase.
Anbefaling: Bekræft, at de centrifugerør, spidser, pipetter osv., der bruges til RNA-ekstraktion, alle er RNase-frie.
Oprenset opnået RNA påvirker nedstrøms eksperimenter
RNA oprenset af rensningssøjlen, hvis saltioner, proteinindhold er for stort, vil påvirke nedstrømseksperimentet, såsom: omvendt transkription, Northern Blot et al.
1. Det eluerede RNA har saltionrester.
Anbefaling: Bekræft, at den korrekte mængde ethanol er blevet tilsat til buffer RW2, og udfør 2 rensningssøjlevaske ved den centrifugalhastighed, der er angivet for drift;hvis der er nogen saltionrester, skal du lade rensekolonnen stå til buffer RW2 i 5 minutter ved stuetemperatur og udføre centrifugering for at maksimere fjernelse af saltkontamination.
2. Ethanolrest i elueret RNA.
Anbefaling: Bekræft, at efter vask med buffer RW2 skal du udføre centrifugeringsoperationen med tomme rør ved den centrifugeringshastighed, der er angivet for drift, øge tiden for centrifugeringen af tomme rør til 2 minutter, hvis der stadig er ethanolrester, eller lade den stå ved stuetemperatur i 5 m.
