Vejledninger til problemanalyse

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Intet RNA kan ekstraheres, eller udbyttet af nukleinsyre er lavt

Der er normalt mange faktorer, der påvirker genvindingseffektiviteten, såsom: prøve-RNA-indhold, driftsmetode, elueringsvolumen osv..

Analyse af almindelige årsager:

1.Isbad eller lavtemperatur (4 °C) centrifugering under drift.

Forslag: Rumtemperatur (15-25 ° C) drift, aldrig isbad og lav temperatur centrifuge.

2. Forkert prøveopbevaring eller prøveopbevaring i for lang tid.

Forslag: Opbevar prøver ved -80 ° C eller frys i flydende nitrogen, og undgå gentagen fryse-optøning brug;prøv at bruge frisk indsamlede prøver til RNA-ekstraktion.

3.Utilstrækkelig prøvelysering

Anbefaling: Sørg for, at prøven og arbejdsopløsningen (lineær acrylamid) er blevet grundigt blandet og inkuberet i 10 minutter ved stuetemperatur (15-25 ° C)

4. Eluenten blev tilsat forkert

Anbefaling: Sørg for, at RNase-Free ddH2O tilsættes til midten af ​​membranen i rensekolonnen

5. Forkert volumen vandfri ethanol i buffer viRW2

Forslag: Følg instruktionerne, tilsæt den korrekte mængde vandfri ethanol til Buffer viRW2 og bland dem godt, før du bruger sættet.

6.Ukorrekt prøvebrug.

Forslag: 200 µl prøve pr. 500 µl buffer viRL.For stort prøvevolumen vil resultere i reduceret RNA-ekstraktionshastighed.

7. Forkert elueringsvolumen eller ufuldstændig eluering.

Forslag: Rensningskolonnens eluentvolumen er 30-50μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det at tilføje forvarmet RNase-fri ddH₂O og forlænge tiden ved at placere ved stuetemperatur, såsom 5-10 min

8. Oprensningskolonnen har ethanolrester efter skylning i Buffer viRW2.

Forslag: Hvis der stadig er ethanol tilbage efter skylning i buffer viRW2 og centrifugering med tomme rør i 2 minutter, kan rensekolonnen efterlades ved stuetemperatur i 5 minutter efter centrifugering med tomme rør for fuldstændigt at fjerne resterende ethanol.

Nedbrydningen af ​​oprensede RNA-molekyler

Kvaliteten af ​​det oprensede RNA er relateret til faktorer som prøveopbevaring, RNase-kontamination og drift.

Analyse af almindelige årsager:

1.De indsamlede prøver blev ikke gemt i tide.

Forslag: Hvis prøven ikke bruges i tide efter indsamling, skal den opbevares ved -80 ℃ eller flydende nitrogen med det samme.Til ekstraktion af RNA-molekyler, prøv at bruge frisk indsamlede prøver, når det er muligt.

2. Indsamlede prøver blev nedfryset og optøet gentagne gange.

Forslag: Undgå gentagen frysning og optøning (ikke mere end én gang) under prøvetagning og opbevaring, ellers vil udbyttet af nukleinsyre falde.

3.RNase blev indført på operationsstuen, eller der blev ikke brugt engangshandsker, masker osv..

Forslag: Eksperimentet med ekstraktion af RNA-molekyler udføres bedst i et separat RNA-operationsrum, og forsøgsbordet rengøres før forsøget.Bær engangshandsker og -masker under eksperimentet for at undgå RNA-nedbrydning forårsaget af RNase-introduktion.

4.Reagenset er kontamineret med RNase under brugen.

Forslag: Udskift med nyt viralt RNA-isoleringskit til relaterede eksperimenter.

5. RNase-kontaminationen af ​​centrifugerørene, pipettespidserne osv. Forslag: Sørg for, at centrifugerørene, pipettespidserne og pipetterne alle er RNase-frie.

De oprensede RNA-molekyler påvirkede nedstrøms eksperimenter

RNA-molekylerne oprenset af oprensningssøjlen vil påvirke nedstrøms eksperimenter, hvis der er for mange saltioner eller proteiner, såsom: omvendt transkription, Northern Blot osv.。

1.Der er resterende saltioner i de eluerede RNA-molekyler.

Anbefaling: Sørg for, at den korrekte mængde vandfri ethanol er tilsat Buffer viRW2, og vask rensekolonnen to gange i henhold til den korrekte centrifugeringshastighed i betjeningsvejledningen. Hvis der stadig er saltioner tilbage, kan du tilføje Buffer viRW2 til rensekolonnen og lade den stå ved stuetemperatur i 5 min.Udfør derefter centrifugering for at fjerne forurening af saltioner i størst muligt omfang

2.Der er ethanol tilbage i de eluerede RNA-molekyler

Forslag: Når du har bekræftet, at rensningskolonner er blevet skyllet af Buffer viRW2, skal du udføre tomrørscentrifugering i henhold til centrifugalhastigheden i betjeningsvejledningen.Hvis der stadig er ethanol tilbage, kan den efterlades i 5 minutter ved stuetemperatur efter en centrifugering med tomme rør for at fjerne den resterende ethanol i størst muligt omfang.

Instruktionsmanualer:

Instruktionsmanual til viralt RNA-isoleringskit