Blod RNA isoleringssæt
Kitbeskrivelse:
Kat.nr.RE-04011/04013
Til total RNA-oprensning fra fuldblod 104 ≤ Hvide blodlegemer ≤ 107
Isoler og rens blod-RNA hurtigt fra hvide blodlegemer.
-Ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning.Hele sættet er RNase-frit
-Simpelt - alle operationer udføres ved stuetemperatur
-Hurtig—drift kan fuldføres på 20 minutter
-Højt RNA-udbytte: RNA-kun kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA
-Sikker - ingen organisk reagens brugt
-Stor prøvebehandlingskapacitet - op til 200 μl prøver kan behandles hver gang.
-Høj kvalitet - det oprensede RNA er meget rent, fri for protein og andre urenheder og kan opfylde forskellige nedstrøms eksperimentelle applikationer.
Beskrivelser
Sættet vedtager spin-søjlen og formlen udviklet af vores virksomhed, som effektivt kan udvinde høj renhed og høj kvalitet total RNA fra antikoaguleret fuldblod.Sættet indeholder røde blodlegemer lysat (Buffer RCL), som hurtigt og effektivt kan lysere røde blodlegemer og fastholde hvide blodlegemer.Den effektive DNA-rensningskolonne kan nemt adskille supernatanten og cellelysaterne og adsorbere og fjerne genomisk DNA.Betjeningen er enkel og tidsbesparende;Den RNA-only kolonne kan effektivt binde RNA, og med en unik formel kan den behandle et stort antal prøver på samme tid.
Hele systemet RNase-Free gør det ekstraherede RNA ikke-nedbrydeligt;Buffer RW1 og Buffer RW2 buffervaskesystem gør det opnåede RNA fri for protein, DNA, ioner og organisk forbindelsesforurening.
Sættets indhold
| Blood Total RNA Isolation Kit | ||
| Sættets sammensætning | RE-04011 | RE-04013 |
| 50 gange | 200 gange | |
| Buffer RCL (10×) | 52,5 ml | 210 ml |
| Buffer BRL1* | 30 ml | 120 ml |
| Buffer BRL2 | 18 ml | 66 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-fri ddH2 O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-kun kolonne | 50 sæt | 200 sæt |
| DNA-rensningssøjle | 50 sæt | 200 sæt |
| brugervejledning | 1 eksemplar | 1 eksemplar |
Egenskaber og fordele
-Ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning.Hele sættet er RNase-frit.
-Simpelt - alle operationer udføres ved stuetemperatur.
-Hurtig—drift kan fuldføres på 20 minutter.
-Højt RNA-udbytte: Kun RNA-kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA.
-Sikker - ingen organisk reagens brugt.
-Stor prøvebehandlingskapacitet - op til 200 μl prøver kan behandles hver gang.
-Høj kvalitet - det oprensede RNA er meget rent, fri for protein og andre urenheder og kan opfylde forskellige nedstrøms eksperimentelle applikationer.
Sættets parametre
Anvendelse af kit:
Det er velegnet til ekstraktion og oprensning af totalt RNA fra pattedyrs fuldblod.
Workflow
Opbevaringsforhold
Buffer RCL (10×) bør opbevares ved 2-8 ℃;andre komponenter i sættet kan opbevares ved stuetemperatur (15-25 ℃) under tørre forhold og kan opbevares i 12 måneder.Buffer BRL1 kan opbevares ved 4 ℃ i 1 måned efter tilsætning af β-mercaptoethanol (valgfrit).
Bemærk: Hvis opløsningen opbevares ved lav temperatur, er den tilbøjelig til nedbør.Sørg for at placere opløsningen i sættet ved stuetemperatur i en periode før brug.Hvis det er nødvendigt, forvarm det i et 37°C vandbad i 10 minutter for at opløse bundfaldet, og bland godt før brug.
Vejledninger til problemanalyse
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Intet RNA kan ekstraheres, eller udbyttet af nukleinsyre er lavt
Der er normalt mange faktorer, der påvirker genvindingseffektiviteten, såsom: prøve-RNA-indhold, driftsmetode, elueringsvolumen osv..
Analyse af almindelige årsager:
1.Isbad eller lavtemperatur (4 °C) centrifugering under drift.
Forslag: Rumtemperatur (15-25 ° C) drift, aldrig isbad og lav temperatur centrifuge.
2. Forkert prøveopbevaring eller prøveopbevaring i for lang tid.
Forslag: Opbevar prøver ved -80 ° C eller frys i flydende nitrogen, og undgå gentagen fryse-optøning brug;prøv at bruge frisk indsamlede prøver til RNA-ekstraktion.
3.Utilstrækkelig prøvelysering
Anbefaling: Sørg for, at prøven og arbejdsopløsningen (lineær acrylamid) er blevet grundigt blandet og inkuberet i 10 minutter ved stuetemperatur (15-25 ° C)
4. Eluenten blev tilsat forkert
Anbefaling: Sørg for, at RNase-Free ddH2O tilsættes til midten af membranen i rensekolonnen
5. Forkert volumen vandfri ethanol i buffer viRW2
Forslag: Følg instruktionerne, tilsæt den korrekte mængde vandfri ethanol til Buffer viRW2 og bland dem godt, før du bruger sættet.
6.Ukorrekt prøvebrug.
Forslag: 200 µl prøve pr. 500 µl buffer viRL.For stort prøvevolumen vil resultere i reduceret RNA-ekstraktionshastighed.
7. Forkert elueringsvolumen eller ufuldstændig eluering.
Forslag: Rensningskolonnens eluentvolumen er 30-50μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det at tilføje forvarmet RNase-fri ddH2O og forlænge tiden ved at placere ved stuetemperatur, såsom 5-10 min
8. Oprensningskolonnen har ethanolrester efter skylning i Buffer viRW2.
Forslag: Hvis der stadig er ethanol tilbage efter skylning i buffer viRW2 og centrifugering med tomme rør i 2 minutter, kan rensekolonnen efterlades ved stuetemperatur i 5 minutter efter centrifugering med tomme rør for fuldstændigt at fjerne resterende ethanol.
Nedbrydningen af oprensede RNA-molekyler
Kvaliteten af det oprensede RNA er relateret til faktorer som prøveopbevaring, RNase-kontamination og drift.
Analyse af almindelige årsager:
1.De indsamlede prøver blev ikke gemt i tide.
Forslag: Hvis prøven ikke bruges i tide efter indsamling, skal den opbevares ved -80 ℃ eller flydende nitrogen med det samme.Til ekstraktion af RNA-molekyler, prøv at bruge frisk indsamlede prøver, når det er muligt.
2. Indsamlede prøver blev nedfryset og optøet gentagne gange.
Forslag: Undgå gentagen frysning og optøning (ikke mere end én gang) under prøvetagning og opbevaring, ellers vil udbyttet af nukleinsyre falde.
3.RNase blev indført på operationsstuen, eller der blev ikke brugt engangshandsker, masker osv..
Forslag: Eksperimentet med ekstraktion af RNA-molekyler udføres bedst i et separat RNA-operationsrum, og forsøgsbordet rengøres før forsøget.Bær engangshandsker og -masker under eksperimentet for at undgå RNA-nedbrydning forårsaget af RNase-introduktion.
4.Reagenset er kontamineret med RNase under brugen.
Forslag: Udskift med nyt viralt RNA-isoleringskit til relaterede eksperimenter.
5. RNase-kontaminationen af centrifugerørene, pipettespidserne osv. Forslag: Sørg for, at centrifugerørene, pipettespidserne og pipetterne alle er RNase-frie.
De oprensede RNA-molekyler påvirkede nedstrøms eksperimenter
RNA-molekylerne oprenset af oprensningssøjlen vil påvirke nedstrøms eksperimenter, hvis der er for mange saltioner eller proteiner, såsom: omvendt transkription, Northern Blot osv.。
1.Der er resterende saltioner i de eluerede RNA-molekyler.
Anbefaling: Sørg for, at den korrekte mængde vandfri ethanol er tilsat Buffer viRW2, og vask rensekolonnen to gange i henhold til den korrekte centrifugeringshastighed i betjeningsvejledningen. Hvis der stadig er saltioner tilbage, kan du tilføje Buffer viRW2 til rensekolonnen og lade den stå ved stuetemperatur i 5 min.Udfør derefter centrifugering for at fjerne forurening af saltioner i størst muligt omfang
2.Der er ethanol tilbage i de eluerede RNA-molekyler
Forslag: Når du har bekræftet, at rensningskolonner er blevet skyllet af Buffer viRW2, skal du udføre tomrørscentrifugering i henhold til centrifugalhastigheden i betjeningsvejledningen.Hvis der stadig er ethanol tilbage, kan den efterlades i 5 minutter ved stuetemperatur efter en centrifugering med tomme rør for at fjerne den resterende ethanol i størst muligt omfang.
Instruktionsmanualer:
Instruktionsmanual til viralt RNA-isoleringskit
