Det lave forhold mellem A260/A230 er normalt forårsaget af urenheder med den maksimale absorptionsbølgelængde ved 230 nm.Lad os se, hvad disse urenheder omfatter:

• Almindelige forurenende stoffer	Absorptionsbølgelængde	Ratio effekt
  Protein	~230nm og 280nm	Samtidig reduktion af A260/A 280og A260/A 280forhold
  Guanidin salt	220-240 nm	Reducer A260/A 280forhold
  Phenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm og 270nm	Reducer A260/A 280forhold
  EDTA	~230nm	Reducer A260/A 280forhold
  Ethanol	230-240 nm	Reducer A260/A 280forhold

 
 
 
Absorptionsbølgelængde og kontrastværdi for almindelige forurenende stoffer

Protein forurening
Proteinforurening kan betragtes som den mest almindelige forurening i nukleinsyreekstraktionsprocessen.Protein eksisterer mellem den øvre vandige fase og den nedreøkologiskfase.Forurening vil reducere forholdet mellem A260/A280 og A260/A230 på samme tid, og forholdet mellem A260/A230 vil ændre sig mere tydeligt end forholdet mellem A260/A280.
Under efterfølgendeomvendt transskriptionor qPCR reaktioner, proteinrester kan hæmme eller forstyrre enzymfunktionen.Den bedste måde at undgå proteinkontamination på er at huske princippet om "snarere mindre end mere, en lille mængde mange gange", når supernatanten aspireres.

2. Guanidinium forurening
hydrochlorid (GuHCl) og guanidinthiocyanat (GTC) har den virkning at denaturere proteiner, som hurtigt kan ødelægge cellemembraner under nukleinsyreekstraktionsprocessen, hvilket forårsager proteindenaturering og udfældning.Absorptionsbølgelængden af ​​GuHCl og GTC er mellem 220-240 nm, ogresterende guanidiniumsalt vil reducere forholdet mellem A260/A230.Selvom det resterende guanidiniumsalt vil reducere forholdet,indvirkningen på downstream-eksperimenter er faktisk ubetydelig.

3. Trizol forurening
Hovedbestanddelen af ​​Trizol er phenol.Phenols hovedfunktion er at lysere celler og frigive proteiner og nukleinsyrestoffer i celler.Selvom phenol effektivt kan denaturere proteiner, kan det ikke fuldstændigt hæmme RNase-aktivitet.Derfor tilsættes 8-hydroxyquinolin, guanidinisothiocyanat, β-mercaptoethanol osv. til TRIzol for at hæmme endogen og eksogen RNase.
Ved ekstraktion af cellulært RNA kan Trizol hurtigt lysere cellerne og hæmme nukleasen frigivet fra cellerne, og den resterende Trizol vil signifikant reducere forholdet mellem A260/A230.
Forarbejdningsmetode: Ved centrifugering skal det bemærkes, at phenolen i Trizol er letopløselig i vandfasen under betingelserne 4° og stuetemperatur.

4. Ethanolrest
Ethanol bruges i den endelige proces til at udfælde DNA'et, mens saltioner, der kan være bundet til DNA'et, opløses.Absorptionsbølgelængden af ​​den højesteabsorptionshøjde påethanol er også ved 230-240 nm, hvilketvil også reducere forholdet mellem A260/A230.
Metoden til at undgå ethanolrester kan gentages to gange under den endelige eluering, idet man blæser indstinkskabi to minutter for at lade ethanolen fordampe fuldstændigt, før der tilsættes buffer til eluering.
Det skal dog vides, at forholdet kun er et evalueringsindeks for RNA-kvalitet.Hvis de ovennævnte operationer er strengt reguleret, vil afvigelsen mellem forholdet og standardområdet ikke have stor betydning for nedstrømsforsøg.
Relaterede produkter:
Animal Total RNA Isolation kit
Plant Total RNA Isolation kit
Cell Total RNA Isolation kit
Plant Total RNA Isolation kit Plus