FAQ'er forAnimal Total RNA Isolation kit

Følgende analyse af de problemer, du kan støde på idyrevæv/celle-RNA-ekstraktion will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA ekstraheres ikke, eller RNA-udbyttet er lavt

Der er ofte en række forskellige faktorer, der påvirker restitutionseffektiviteten, såsom: vævsprøve-RNA-indhold, driftsmetode, elueringsvolumen osv.

1. Isbad eller kryogen (4 °C) centrifugering blev udført under drift.

Anbefaling: Kør ved stuetemperatur (15-25 °C) gennem hele processen, isbad ikke og centrifuger ved lave temperaturer.

2. Forkert prøvekonservering eller for lang prøveopbevaringstid.

Anbefaling: Opbevar prøver ved -80 °C eller frys i flydende nitrogen og undgå gentagen fryse-optøning;prøv at bruge frisk væv eller dyrkede celler til RNA-ekstraktion.

3. Utilstrækkelig prøvelysering.

Anbefaling: Ved homogenisering af væv skal det sikres, at vævet er tilstrækkeligt homogeniseret, og at vævscellerne er tilstrækkeligt opdelt til at forklare frigivelsen af ​​RNA.

4. Eluenten er ikke tilsat korrekt.

Anbefaling: Bekræft, at RNase-Free ddH₂O tilsættes dråbevis til midten af ​​rensesøjlemembranen.

5. Det korrekte volumen af ​​absolut ethanol blev ikke tilsat til buffer RL2 eller buffer RW2.

Anbefaling: Følg instruktionerne, tilsæt den korrekte mængde absolut ethanol til Buffer RL2 og Buffer RW2 og bland godt, før sættet tages i brug.

6. Vævsprøvedosering er ikke passende.

Anbefaling: Brug 10-20 mg væv eller (1-5) × 10⁶celler pr. 500 μl buffer RL1, da overdreven vævsanvendelse kan resultere i reduceret RNA-ekstraktion.

7. Ukorrekt elueringsvolumen eller ufuldstændig eluering.

Anbefaling: Rensningskolonnens elueringsvolumen er 50-200 μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det at forlænge stuetemperaturplaceringstiden efter tilsætning af forvarmet RNase-fri ddH₂O, fx i 5-10 min.

8. Oprensningssøjlen har ethanolrest efter buffer RW2-vask.

Anbefaling: Hvis der er ethanolrester efter vask med buffer RW2, centrifugering af tomme rør i 1 min., kan tiden for centrifugering af tomme rør øges til 2 minutter, eller rensekolonnen kan placeres ved stuetemperatur i 5 minutter for at fjerne den resterende ethanol tilstrækkeligt.

Oprenset RNA nedbrydes

Kvaliteten af ​​det oprensede RNA er relateret til faktorer såsom bevarelse af prøven, RNase-kontamination og manipulation osv.

1. Vævsprøver opbevares ikke i tide.

Anbefaling: Hvis vævsprøver eller celler ikke bruges rettidigt efter indsamling, skal de straks kryoopbevares ved -80 °C eller flydende nitrogen.For at ekstrahere RNA skal du bruge en nyudtaget vævs- eller celleprøve, når det er muligt.

2. Gentagen fryse-optøning af vævsprøver.

Anbefaling: Når du opbevarer vævsprøver, er det bedst at skære dem i små stykker til konservering, og fjerne et af stykkerne, når du bruger dem for at undgå gentagen fryse-optøning af prøven og nedbrydning af RNA.

3. RNase indføres eller ikke bærer engangshandsker, masker osv. under operationen.

Anbefaling: RNA-ekstraktionsforsøg udføres bedst i separate RNA-manipulationsrum, og bordet ryddes inden eksperimentet.

Bær engangshandsker og -masker under eksperimentet for at minimere RNA-nedbrydning forårsaget af introduktionen af ​​RNase.

4. Reagenser er kontamineret med RNase under brug.

Anbefaling: Udskift med et nyt Animal Total RNA Isolation Kit til relaterede eksperimenter.

5. Centrifugerørene, spidserne osv., der anvendes til RNA-manipulation, er kontamineret med RNase.

Anbefaling: Bekræft, at de centrifugerør, spidser, pipetter osv., der bruges til RNA-ekstraktion, alle er RNase-frie.

Oprenset opnået RNA påvirker nedstrøms eksperimenter

RNA oprenset af rensningssøjlen, hvis saltioner, proteinindhold er for stort, vil påvirke nedstrømseksperimentet, såsom: omvendt transkription, Northern Blot et al.

1. Det eluerede RNA har saltionrester.

Anbefaling: Bekræft, at den korrekte mængde ethanol er blevet tilsat til buffer RW2, og udfør 2 rensningssøjlevaske ved den centrifugalhastighed, der er angivet for drift;hvis der er nogen saltionrester, skal du lade rensekolonnen stå til buffer RW2 i 5 minutter ved stuetemperatur og udføre centrifugering for at maksimere fjernelse af saltkontamination.

2. Ethanolrest i elueret RNA.

Anbefaling: Bekræft, at efter vask af buffer RW2 skal du udføre centrifugeringsoperationen med tomme rør ved den centrifugeringshastighed, der er angivet for drift, øge tiden for centrifugeringen af ​​tomme rør til 2 minutter, hvis der stadig er ethanolrester, eller lade den stå ved stuetemperatur i 5 minutter efter centrifugeringen af ​​tomme rør for at maksimere fjernelse af ethanolrester.

Isolering af nukleinsyreprøvetyper

Foregenes RNA-isoleringssæt kan opnå total RNA-isolering/-ekstraktion fra følgende prøvekilder: Dyrevæv, plante, celler, virus, blod osv.

Hvordan opbevarer jeg sættet

Opbevaring ved stuetemperatur i 24 måneder.