PCR-metoder og nukleinsyreaerosolkontamination i nukleinsyretestlaboratorier er som to sider af en mønt.Vi kan kun vælge at have det eller ej, men vi kan ikke vælge, om vi vil have det eller bruge det.

1. Screening af DNA-fjerner

For at opnå den rumlige fjernelse af nukleinsyreaerosolkontamination er det først nødvendigt at screene DNA-fjernere, der kan fjerne nukleinsyrer i flydende tilstand.For der er ikke mange DNA-fjernere, der virkelig virker.For den eksperimentelle metode henvises til: DNA-fjerner kan ikke være et "hemmeligt hjørne" af laboratoriet!

I dette eksperiment blev 100 kopier/μL (CT ca. 31) af ASFV-plasmid og DNA-fjerner kvantificeret ved digital PCR blandet i lige store volumener og derefter reageret ved stuetemperatur i henholdsvis 10 minutter, 20 minutter og 30 minutter.Efter nukleinsyreekstraktion blev qPCR-amplifikation udført.En positiv kontrol blandet med plasmid og vand blev sammenlignet.Da forsøget ikke blev afsluttet på samme tid, kan der være en vis afvigelse mellem resultaterne, men det påvirker ikke forsøgets konklusion.Indtil videre har jeg vurderet 10 kommercielle produkter til DNA-fjerner.Kun nr. 1, nr. 6 og nr. 8 produkter kan effektivt nedbryde plasmid-DNA i flydende tilstand.Andre produkter har næsten ingen effekt.

Tabel 1 Nukleinsyrefjernelseseffekt af kommercielt tilgængelig DNA-fjerner

2. DNA-fjernelseseffekteksperimentet af almindeligt anvendte desinfektionsmidler

1. Screening af almindeligt anvendte desinfektionsmidler

Der er mange typer desinfektionsmidler, der almindeligvis anvendes i laboratorier: aldehyder, phenoler, alkoholer, kvaternære ammoniumsalte, peroxider, klorpræparater og syrer og baser.Disse desinfektionsmidlers desinfektionseffekter på mikroorganismer er blevet fuldt verificeret ved forsøg, men der er ikke tilstrækkelige eksperimentelle data om nukleinsyrernes nedbrydningseffekt.Nukleinsyretestlaboratorier har brug for et desinfektionsmiddel, der ikke kun har en god desinfektionseffekt på mikroorganismer, men også kan nedbryde DNA.Testresultaterne viser, at kun to klorpræparater af 84 desinfektionsmiddel og trichlorisocyanursyre og 1 M saltsyre opfylder kravene.Da 1 M saltsyre er stærkt ætsende, anbefales det, at klorpræparater anvendes som affaldsbortskaffelse i nukleinsyretestlaboratorier.Klorpræparater er dog ætsende for metaller og kan ikke bruges til desinfektion af instrumenter og udstyr.

Tabel 2 DNA-fjernelseseffekter af forskellige typer desinfektionsmidler

2. Den mindste effektive koncentration af klorpræparater

Klorbaserede desinfektionsmidler har en stærk DNA-nedbrydningseffekt, men på grund af deres metalætsning og -irritation kan de bruges til at rengøre gulvet, ikke-metal bordplader, iblødsætningsspidser, centrifugerør og andre testgenstande.

Ifølge "New Coronary Pneumonia Epidemic Disinfection Technical Guidelines": Forurenende stoffer (patienters blod, sekret og opkast) tilgængeligt klor 5g/L-10g/L klorholdigt desinfektionsmiddel;gulve, vægge og objektoverflader bruger tilgængeligt klor 1g/L Klordesinfektionsmiddel: Tøj, sengetøj og andre tekstiler gennemblødes først i klordesinfektionsmiddel med 0,5g/L tilgængeligt klor i 30 minutter og rengøres derefter som normalt.

Tabel 3 DNA-fjernelseseffekt af forskellige koncentrationer af klordesinfektionsmiddel

Testresultaterne viser, at: når den effektive klorkoncentration er større end eller lig med 1,2 g/L, kan det klorholdige desinfektionsmiddel fuldstændigt nedbryde 100 kopier/μL plasmid, når det bruges i 5 minutter.Ved virkning i 10 minutter kan 84-desinfektionsmiddel med en effektiv klorkoncentration større end eller lig med 0,6 g/L nedbryde 100 kopier/μL plasmider fuldstændigt.

3. Luftfjernelseseksperiment forurenet af nukleinsyreaerosol

Hvordan renser man luften, der er forurenet af nukleinsyreaerosoler?De fleste af tankerne er at skabe et aerosol-forurenet miljø og derefter rense det op, eller at rense nukleinsyrer efter kontaminering.For mig er et eksperiment, der ikke kan gentages, og resultaterne af forsøget ikke kan analyseres kvantitativt, meningsløst, så jeg lånte nogle metoder til desinficerende luftdesinfektion.Se "GB27948-2020 Generelle krav til luftdesinfektionsmidler" og "Desinfektionstekniske specifikationer"

1. Test materialer

1.1 DNA-fjerner: I dette eksperiment blev to kommercielt tilgængelige DNA-fjernere 6 og 8 i tabel 1 udvalgt.

1.2 Testplasmid: I betragtning af, at CT-værdien for det meste laboratorieforurening vil være højere end 30, er koncentrationen af ​​ASFV-genplasmid, der anvendes denne gang, omkring 100 kopier/μL, og den fluorescerende kvantitative PCR-CT er omkring 31,07.Tilføj plasmidet til den flockende vatpind og lufttør.

1.3 Testinstrument: Bilingkehan KVBOX desinfektionsinstrumentet, som er venligt støttet af Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., har fremragende luftdesinfektionsydelse med hydrogenperoxiddesinfektionsmiddel og kan effektivt dræbe sporer og andre mikroorganismer.

1.4 Testrum: et lukket transfervindue på omkring 0,1 kubikmeter.

2. Testmetode

Mængden af ​​desinfektionsmiddel indstillet på desinfektionsmaskinen er 10 ml, og koncentrationen er 100 ml/m3, hvilket er meget højere end "GB27948-2020 Generelle krav til luftdesinfektionsmidler": ved brug af aerosolspraydesinfektion skal mængden af ​​desinfektionsmiddel være ≤10 ml/m3