Laboratorietestning begynder med prøveindsamling, og prøveindsamling er den nemmeste at overse.Det vigtigste for prøveindsamlingen er at vælge den korrekte prøvetype, bruge passende prøvetagningsværktøjer og udføre rimelig transport og forarbejdning.

I.Sample type

Almindelige prøvetyper er som følger:

Prøveudtagningsmetoden kan henvise til de tekniske specifikationer for miljøovervågning af den nye coronavirus på landbrugshandelsmarkedet (basar)":

1. Vat prøver fra svælgpodninger, hænder, tøj og andre genstande fra praktiserende læger: det er påkrævet at bruge viruskonserveringsopløsningen i virusprøverøret og infiltrere prøvetagningsbomuldsprøverne fuldstændigt.Jordoverfladen) påføres gentagne gange og skylles mere end 3 gange.Samtidig er det nødvendigt at udføre multi-point distribueret prøvetagning på overfladen af ​​det prøvede objekt.

2. Fødevareoverfladepodningsprøver: Fødevareprøver kan ikke indsamles direkte.Maden, der skal indsamles, skal adskilles omhyggeligt og opbevares i en ren prøvetagningspose, før podningsprøver tages.Det er påkrævet at bruge viruskonserveringsopløsningen i virusprøveglasset, efter at prøveudtagningsvatpinden er blevet helt gennemblødt, til gentagne gange at smøre og skylle overfladen af ​​fødevareprøven, der skal indsamles, mere end 3 gange.Samtidig er det nødvendigt at udføre flerpunktsfordeling på prøveoverfladen.

3. Spildevandsprøver: I henhold til fordelingen af ​​afløbssystemet på markedet vælges 2-3 spildevandsprøveudtagningssteder med fokus på den interne ledningsnetopsamling, nedstrøms for vandføringsretningen eller forbindelsen til det kommunale ledningsnet.For at opsamle en podepindsprøve skal du nedsænke den i kloakvandet med en bomuldspind for at få den til at adsorbere kloakvandet og skylle den i prøvetagningsrøret mere end 3 gange.For at indsamle spildevandsprøver skal du bruge polyethylenplastikflasker til at indsamle 30-500 ml spildevandsprøver;til spildevandsopsamling med en volumen større end 500 mL kan der anvendes polyethylen-plastikspande eller specialberigningsudstyr til vandprøver på stedet.Samtidig er det nødvendigt at foretage flerpunktsfordeling til prøvetagningsstedet for spildevand.

4. Dyreprøver: For levende dyr kan prøveudtagningsprøver bruges til at indsamle kropsoverfladepodninger, orofaryngeale podninger og anale podninger, og ekskrementer eller sekretprøver kan også opsamles og registreres i overensstemmelse hermed på registreringsarket.For dyreprøver, der har gennemgået afhudning osv., skal du bruge vatpinde til at indsamle deres kropsoverflade- og kropshule-podningsprøver.Det er påkrævet at bruge viruskonserveringsopløsningen i virusprøverøret til fuldstændigt at infiltrere prøvetagningsbomuldspinden og derefter gentage påføringen af ​​overfladen af ​​fødevareprøven, der skal indsamles.Shabu mere end 3 gange.Samtidig er det nødvendigt at udføre flerpunktsfordeling på prøveoverfladen.

5. Andre apparater: beholdere til transport og opdræt af dyr såsom bure eller fisketanke.Først skal du observere eller forstå de specifikke typer dyr, der opbevares og opdrættes i beholderen, og opsaml podepindeprøver på beholderens indervæg eller flydende prøver af indholdet.

6. Indsaml aerosolprøver i områder, hvor mennesker samles, dårligt ventilerede lokale handelsområder, kontorer og hvilerum.

II.Sampling værktøjer
1. Blodopsamlingsrør
Hvis du skal foretage nukleinsyretestning og antikoagulantprøver senere, anbefales det at bruge et vakuumblodkar indeholdende EDTA-antikoagulant til at opsamle blod;til serumprøver anbefales det at bruge et vakuum blodkar uden antikoagulant.

2. Prøvepodepind

Det anbefales at bruge podepinde af polypropylen i stedet for podepinde af calciumalginat eller vatpinde med træstænger, da de kan indeholde stoffer, der inaktiverer visse vira og hæmmer PCR-testning.Vatpinde med bomuldshoveder kan ikke anvendes, fordi bomuldsfibre har en stærk adsorption af protein og ikke let elueres i den efterfølgende konserveringsopløsning.

I "Tekniske specifikationer for 10-i-1 blandet indsamling og påvisning af nye coronavirus-nukleinsyrer" er det klart fastlagt, at "prøveudtagningspinden skal være lavet af polyester, nylon og andre ikke-bomulds- og ikke-calciumalginatmaterialer, og håndtaget skal være lavet af ikke-træmateriale.Knækpunktet er cirka 3 cm fra toppen af ​​podepinden, som er let at bryde.”

CDC i USA nævnte også "Brug kun syntetiske fiberservietter med plast- eller trådskafter.Brug ikke podepinde af calciumalginat eller vatpinde med træskaft,da de kan indeholde stoffer, der inaktiverer nogle vira og hæmmer PCR-testning.

I øjeblikket er en udbredt anvendelse af en steril engangspind af nylon, kombineret med en plastikstang.Den flockende vatpind har bedre vandabsorption og frigivelseshastighed.Ifølge forskellige prøveudtagningssteder har podehovedet også forskellige størrelser og fibre.Tykkelsen.”

3. Prøve transportkonserveringsopløsning

Virusinaktiveringskonserveringsopløsning: en passende mængde guanidinsaltkoncentration og en række forskellige viruslysekomponenter kan direkte lysere viruset for at frigive nukleinsyre, inaktivere RNase og DNase og sikre integriteten af ​​nukleinsyre, som kan bruges til efterfølgende qPCR-detektion.Det kan ikke bruges til virusdyrkning og isolering.

Virustransport- og konserveringsopløsning: indeholder salte, aminosyrer, vitaminer, glukose og protein, der er nødvendige for virusets overlevelse, som kan opretholde virussens aktivitet.Det kan bruges til nukleinsyreekstraktion og påvisning af virussen i fremtiden, og det kan også bruges til dyrkning og adskillelse af virussen.

4. Prøvekonserveringsrør og prøvepose

Prøveopbevaringsrøret skal være et sterilt plastikrør med skruelåg, der ikke adsorberer nukleinsyre.Hvert prøverør skal dækkes med en prøvepose for at forhindre lækage og kontaminering af prøven.

III.Interfererende stoffer i prøven

Interfererende stoffer i PCR-forsøg

1. endogen interferent

Stoffer til stede i kropsprøven kan interferere med påvisningen af ​​andre stoffer.

Blod:hæm (>1mg/ml), hemin (>0,1ng/μl), triglycerider, IgG osv.;

Urin:Urinstof (20 mM);

Taburet:plante polysaccharider, cholat;

Væv:protease, kollagen;

Mælk: protease, calciumion;

Narkotika: antibiotika, antivirale lægemidler, hormoner mv.

Andet.

2. eksogen interfererende

Det kommer fra stoffer, der kan forstyrre påvisningen af ​​andre stoffer in vitro.Prøvetilsætningsstoffer og stoffer, der kan kontaktes under prøveindsamling og -behandling:

Test forsyninger: serumseparationsgel, prøveopsamlingsbeholder og gummiprop, kateter, kateterskyllevæske, handskepulver osv.

Antikoagulant: heparin (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM), etc.;

Organiske opløsningsmidler: isopropanol (>0,1 IE/ml), betain, dimethylsulfoxid, formamid, glycerin, PEG, etc.;

Desinfektionsmidler: alkoholer (ethanol>1%), aldehyder, phenoler (phenol>0,2%), peroxider, stærke syrer (HCL), stærke alkalier (NaOH), etc.;

Vaskepulver:SDS (>0,005%);

Jord: Humus

Farvestof: Indigo

Andet.

Under faktiske udendørs prøvetagningsforhold, såsom indsamling af miljøprøver, kan prøverne indeholde en række interfererende stoffer, og sammensætningen af ​​interfererende stoffer på hvert sted er forskellig, hvilket kræver, at PCR-interferenseksperimenter udføres i henhold til lokale forhold.

IV.Prøveopbevarings- og transportbetingelser

Frisk indsamlede kliniske prøver skal sendes til laboratoriet inden for 2 til 4 timer efter indsamling ved 2°C til 8°C.Opbevares ved 4 ℃ inden for 24 timer.Prøver, der anvendes til virusisolering og nukleinsyredetektion, bør testes så hurtigt som muligt.Prøver, der kan testes inden for 24 timer, kan opbevares ved 4°C;Prøver, der ikke kan påvises inden for 24 timer, skal opbevares ved -70°C eller derunder (hvis ikke - Opbevares ved 70°C i køleskab ved -20°C).

Resumé:Standardiseret indsamling, transport og opbevaring af prøver er afgørende for efterfølgende test.De falske negativer fra mange laboratorietests er forårsaget af forkert indsamling, transport og opbevaring af prøver, der fører til nedbrydning af viral nukleinsyre.Mange laboratorier ignorerer dog stadig vigtigheden af ​​prøveudtagning.Jeg håber, at denne artikel kan vække alles opmærksomhed på prøveudtagning og gøre mere videnskabelig og rimelig prøveudtagning!

Relateret produkt:

SARS-CoV-2 Variant Nucleic Acid Detection Kit (I) (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) - Til påvisning af mutanter fra Brasilien, Sydafrika og Storbritannien