Hvor meget ved du

Om Nucleinsyreekstraktion

Begyndelsen og slutningen af ​​oprenset nukleinsyre

Alt er svært i begyndelsen, renset nukleinsyre er mest

Igangsættelse af molekylære forsøg, til efterfølgende forsøg

Succes eller fiasko har en afgørende indflydelse.

Spor/ultra-spor UV-spektrofotometer er foretrukket af mange videnskabelige forskere, fordi det kan detektere nukleinsyrekoncentrationer og protein- og saltionrester enkelt, hurtigt og økonomisk.

Som vi alle ved, betyder A260 nukleinsyreabsorbans OD værdi, A280 betyder proteinkoncentration absorbans OD værdi, A230 betyder saltion koncentration absorbans OD værdi, så A260 kan konvertere nukleinsyre koncentration, A260/280 betyder protein rest, A260/230 betyder salt ion rest, men dette er kun en regel, der er opdaget af en, og et stort antal forskerne har fundet resultater.konventionel” at tro, at det kan forklare renheden af ​​DNA og RNA tilet vist omfang.Det er ikke den eneste standard til identifikation af nukleinsyreudbytte og renhed, den bruges kun som reference, og den er ikke en "guldstandard".

Thermo Fisher ND-2000 manualen understreger pålideligheden af ​​testresultaterne

Årsagen er, at resultaterne opnået ved at bruge et mikro/ultramikro UV-spektrofotometer kun afspejler udbyttet og renheden af ​​nukleinsyre fra siden, og der er mange påvirkningsfaktorer (optisk vej, prøvevolumen, prøvekoncentration, pH-værdi, andre ioner, der påvirker absorbansmålingen osv.), den målte OD-værdi er ikke nødvendigvis nøjagtig.På samme tid har enkeltstrenget DNA, dobbeltstrenget DNA, RNA, dNTP'er og nogle proteiner, på grund af den manglende specificitet af absorbansværdibestemmelsesmaterialet, alle absorptionstoppe ved 260 nm bølgelængde, og koncentrationen bestemt af A260 alene er ikke nødvendigvis det rigtige DNA eller RNA.Koncentration og dens integritet og nedbrydning kan ikke bedømmes.

Så hvordan bedømmer man kvaliteten af ​​vores rensede nukleinsyre?Ud over at bruge et mikro/ultramikro UV-spektrofotometer til detektion, kræves der også metoder såsom agarosegelelektroforese til visuelt at vise nukleinsyrens renhed og integritet og til at angive koncentrationen i et vist omfang.På denne måde er nukleinsyreudbyttet og renheden opnået fra påvisningsresultaterne af forskellige metoder troværdige.

Eksperimentel diagramsammenligning

Genomisk DNA fra H1299-celler blev ekstraheret ved hjælp af firma A's DNA-ekstraktionssæt, og der blev set betydelig urenhedsforurening, hvilket resulterede i høje OD-værdier

(OD-måleværdi og tilsvarende elektroferogram)

Evalueringsindeks

Er der en "guldstandard" for nukleinsyreudbytte og kvalitetstestning?

Så vidt vi ved, er der ingen enkel, hurtig og billig metode.Uanset om det er spektrofotometer, gelelektroforese eller massespektrometri, afspejler de alle koncentrationen og renheden af ​​nukleinsyre i opløsningen fra forskellige aspekter, og de skal bedømmes ved at henvise til hinanden.

Det bedste evalueringsindeks er altidden opfølgende eksperimentelle ansøgning.Det påvirker ikke effektiviteten af ​​revers transkription og PCR-amplifikation.At opnå pålidelige amplifikationsprodukter og Ct-værdier og opnå en komplet sekvens ved sekventering er vellykket nukleinsyreekstraktion.

For at opsummere, bør synet på ratio-only teori udfordres af synet om "brug af gode nedstrøms eksperimentelle resultater som gode ekstraktionsparametre"!

Anbefalet Foregene DNA RNA ekstraktionssæt for at få høj DNA/RNA renhed:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/