At føre

Langt ikke-kodende RNA, lncRNA er et ikke-kodende RNA med en længde på mere end 200 nukleotider, generelt mellem 200-100000 nt.lncRNA regulerer genekspression på epigenetiske, transkriptions- og post-transskriptionelle niveauer og deltager i X-kromosomdæmpning, genomprægning og kromatinmodifikation, transkriptionsaktivering, transkriptionsinterferens, nuklear transport, cellecyklusregulering, celledifferentieringsregulering og dosiskompensationseffekter, der forekommer i mange andre tætte kompensations-effekter (Dosering og kompensationseffekter) ion af menneskelige sygdomme, og er i øjeblikket et af hot spots inden for biomedicin.

01  Typer og karakteristika af LncRNA

lncRNA er opdelt i mange typer i henhold til de forskellige kilder til dets dannelse, som vist i figuren ovenfor.Har følgende egenskaber:

1. lncRNA'er er normalt længere, med dynamisk ekspression og forskellige splejsningsmetoder under differentiering
2. Sammenlignet med kodende gener har lncRNA normalt et lavere ekspressionsniveau
3. De fleste lncRNA'er har tydelig tidsmæssig og rumlig ekspressionsspecificitet i processen med vævsdifferentiering og udvikling
4. Der er karakteristiske udtryk i tumorer og andre sygdomme
5. De subcellulære placeringer af lncRNA er forskellige
6. Rækkefølgen er lav i bevaring, men funktionen har en vis grad af bevaring mv.

02 Ofte stillede spørgsmål om LncRNA omvendt transkription

På grund af det lave indhold af lncRNA i celler, lang længde og struktur på højt niveau, har sådan RNA ofte komplekse strukturer såsom stamløkker eller hårnåle, og RT-qPCR er tilbøjelig til problemer med mislykket revers transkription eller lav effektivitet.

03 LncRNA revers transkriptionsopløsning

I den centrale regel kaldes processen med RNA-vira, der bruger deres egen revers transkriptase til at syntetisere DNA ved hjælp af RNA som skabelon, revers transkription.Processen med at bruge RNA-virus revers transkriptase til at syntetisere cDNA-skabelon in vitro kaldes revers transkription.Hovedelementerne inkluderet i det omvendte transkriptionssystem: RNA-skabelon, revers transkriptase, primere og andre komponenter.

1.RNA skabelon

RNA-skabelonens indflydelse på revers transkription afspejles i dens struktur, renhed og integritet.Jo højere renhed og integritet af det ekstraherede RNA er, jo højere effektivitet er revers transkription og jo mere nøjagtige er de efterfølgende kvantitative resultater.RNA'et oprenset med almindeligt anvendte RNA-ekstraktionsreagenser indeholder ofte rester af alkohol og guanidinsalte, som har en stærk hæmmende virkning på de fleste revers transkriptase.

2. Omvendt transkriptase

Revers transkriptase har en central indflydelse i hele revers transkriptionssystemet.Den passende temperatur for revers transkriptase, der anvendes i de fleste laboratorier, er generelt 42°C.Faktisk kræver åbningen af ​​RNA-strukturen på højt niveau en højere temperatur, og kravene til revers transkriptase er højere.

3.Primer

Revers transkriptionsprimere inkluderer genspecifikke primere, tilfældige primere og Oligo dT-primere.De fleste lncRNA'er indeholder ikke polyA-haler, og det er vigtigt at matche de tilfældige primere korrekt med Oligo dT.

4.Andre komponenter

I lyset af det faktum, at RNA er særligt let at nedbryde, kan introduktionen af ​​komponenter i revers transkriptionssystemet minimeres, hvilket effektivt kan forhindre indtrængen af ​​RNase og sikre en jævn fremgang af revers transkription.

Foregeneopnår fra RNA-skabelon, revers transkription til qPCR

Omfattende eskorter din lncRNA-detektion

Animal Total RNA IsolationKit (med gDNA-fjernelseskolonne)

Celle Total RNA IsolationKit (med gDNA-fjernelseskolonne)

Lnc-RT HeroTM I(Med gDNase)(Super Premix til førstestrengs cDNA-syntese fra lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Grøn I

Afordele ofRNA ekstraktion:

Sættet bruger tredje generations RNA-ekstraktionsteknologi, ingen grund til at bruge DNase.

11 minutter fra 96, 24, 12 og 6-brønds pladedyrkede celler, højeffektiv ekstraktion af gDNA-fri, høj renhed, højkvalitets totalcelle-RNA.

Fordele ved lncRNA revers transkription:

Et omvendt transkriptionssystem specielt udviklet til LncRNA til hurtigt at fjerne genomisk DNA-kontamination.

Det omvendte transkriptionssystem har høj termisk stabilitet og har stadig en god omvendt transkriptionsydelse ved 50°C.

Skabeloner med højt GC-indhold og kompleks sekundær struktur kan vendes med høj effektivitet.

Fordeleof qPCR:

Hotstart Foregene Taq Polymerase har højere amplifikationseffektivitet, højere amplifikationsfølsomhed og højere amplifikationsspecificitet

Den optimerede Real PCR Easy Mix gør, at SYBR Green I har højere detektionsfølsomhed, og dens fluorescensintensitet er 3-5 gange højere end tilsvarende produkter, som kan opfylde behovene for forskellige typer af fluorescens kvantitative eksperimenter.