Opbygning af SOP System

Etabler PCR-eksperiment-SOP for at standardisere eksperimentpersonalets adfærd.

Eksperimentatorerne overholder strengt driftsprocedurerne og minimerer PCR-forurening, der kan være forårsaget af menneskelige faktorer eller forhindrer forekomsten af ​​forurening i operationen.Derudover skal forsøgslederen have den tilsvarende faglige viden og færdigheder, herunder færdigheder i at betjene relateret udstyr, afklare hele arbejdsprocessen, beherske behandlingsmetoderne for kontaminering og laboratoriekvalitetskontrolmetoder og være i stand til at fortolke testresultaterne korrekt.

Bygningsstandard PCR-laboratorium

PCR-laboratoriet er principielt opdelt i fire områder, nemlig reagensforberedelsesområde, prøvebehandlingsområde, amplifikationsområde og amplifikationsproduktanalyseområde.De to første områder er præ-amplifikationsområder, og de to sidste områder er post-amplifikationsområder.Pre-amplifikationszonen og post-amplifikationszonen bør være strengt adskilt.Eksperimentelle materialer, reagenser, registreringspapir, penne, rengøringsmaterialer osv. kan kun flyde fra præ-amplifikationsområdet til post-amplifikationsområdet, det vil sige fra reagensforberedelsesområdet, prøvebehandlingsområdet, amplifikationsområdet og amplifikationsproduktanalyseområdet, og må ikke flyde i den modsatte retning.Luftstrømmen i laboratoriet bør også strømme fra præ-amplifikationsområdet til post-amplifikationsområdet, ikke i den modsatte retning.

Reducer eksperimentelle trin

Hvis laboratoriet kun udfører PCR-detektion og -identifikation, anbefales det at bruge fluorescerende kvantitativ PCR i stedet for konventionel PCR.

Fluorescens kvantitative PCR-detektionsresultater kan indsamles og analyseres ved hjælp af fluorescerende signaler, så der er ingen grund til at åbne låget for elektroforese efter reaktionen, hvilket undgår forurening af PCR-produkter forårsaget af lækage af reaktionsprodukter til dannelse af aerosoler.Hvis du øger antallet af hætteåbninger under påfyldningstrinnet af gelelektroforese, vil der sandsynligvis forekomme aerosolkontamination.Det anbefales at fremme anvendelsen af ​​kvantitativ PCR og gradvist erstatte kvalitativ PCR.

Vedtag UNG anti-forureningssystem

UNG anti-PCR-produktkontamineringssystem bruges til PCR-reaktionen.

Systemet bruger dUTP i stedet for dTTP.Efter PCR-reaktionen inkorporeres alle PCR-produkter (DNA-fragmenter) med dUTP;i den næste runde af PCR-reaktion inkuberes UNG-enzymet tilsat til systemet ved 37°C i 5 minutter før PCR, som kan være specifikt. Nedbryd alle DNA-fragmenter indeholdende dUTP, og udfør derefter PCR-reaktion.Dette kan fuldstændig fjerne aerosolforureningen forårsaget af PCR-produkter.Effekten er vist i figuren nedenfor:

Bemærk: For den direkte PCR-serie kan du vælge serieprodukterne fra FJ Biotechs anti-PCR-produktforureningssystem

Antyder

For laboratorier, der udfører genotypetestning i stor skala, anbefales det kraftigt at bruge UNG anti-PCR-produktkontamineringssystem til test af reagenser ud over konstruktionen af ​​rimelige laboratorier.

Påmindelse: Brugen af ​​dette system kan ikke fjerne PCR-produktkontaminationen, der allerede er forårsaget.Derfor bør UNG-systemet anvendes i begyndelsen af ​​den relevante test, og UNG-systemet bør altid bruges til PCR-amplifikation for at forhindre kontaminering af PCR-produkter.Falsk positiv.

Det anbefales at bruge Direct PCR-UNG-systemet fra Forge Biotech, når der udføres test i stor skala, såsom: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Denne serie af kits fra Foregene kan ikke kun udføre PCR-detektion hurtigt og i stor skala, men også effektivt forhindre og kontrollere PCR-produktkontamination.