1: Udskift de eksperimentelle forsyninger i tide

Opsæt (NTC) negativ kontrol og gentag det mange gange.Når det er konstateret, at der er PCR-produktkontamination i laboratoriet, skal alle eksperimentelle forsyninger udskiftes i tide.Såsom: genfortynd og klargør primerne, re-steriliser pipettespidsen, EP-røret, ddH2O osv., udskift med en ny pipette og lån midlertidigt andre laboratorier til at udføre PCR-forsøg.Det kontaminerede laboratorium skal ventileres og bestråles med ultraviolette stråler, indtil PCR-produktkontaminationen er elimineret, før forsøget fortsættes.

2: Forlæng UV-eksponeringstiden

Det er værd at bemærke, at for at fjerne DNA-forurening skal almindelig ultraviolet stråling forlænges med 2 timer end normalt.Alligevel er effekten af ​​UV-bestråling på fjernelse af små fragmenter (under 200 bp) af DNA-kontamination stadig ikke god.

Ultraviolet bølgelængde (nm) er generelt 254/300 nm, og det er nok til at bestråle i 30 minutter.Det skal bemærkes, at når man vælger UV til at eliminere kontamineringen af ​​resterende PCR-produkter, skal længden af ​​PCR-produktet og fordelingen af ​​baser i produktsekvensen tages i betragtning.UV-bestråling er kun effektiv for lange fragmenter over 500 bp og har ringe effekt på korte fragmenter.

Under UV-bestråling vil pyrimidinbaserne i PCR-produktet danne dimerer.Disse dimerer kan afslutte forlængelsen, men ikke alle pyrimidiner i DNA-kæden kan danne dimerer, og UV-bestråling kan også bryde dimererne..Graden af ​​dimerdannelse afhænger af UV-bølgelængden, typen af ​​pyrimidindimer og sekvensen af ​​nukleotider, der støder op til dimerstedet.Hvis de PCR-amplificerede fragmenter er små, anbefales det derfor at bruge UNG anti-PCR-produktkontamineringssystem.

3: Almindelig brugte DNA-forureningsrensere

Der dannes let aerosoler, når der tilføjes pipetter, hvilket er svært at undgå, og det vil sætte sig hurtigt.Derfor er det utvivlsomt et godt valg hyppigt at bruge specielle DNA-forureningsrensere for at forhindre spredning af DNA-forurening.

4: Brug UNG anti-forureningssystem

Efter at PCR-produktkontaminationen er fjernet, kan testlaboratoriet bruge UNG anti-PCR-produktkontaminationssystemet til at forhindre PCR-produktkontamination.I almindelige laboratorier kan du udføre simple eksperimentelle skillevægge, strengt adskille PCR-produktområdet fra andre områder, etablere visse laboratorieregler og -forskrifter og gennemføre relevant træning for at forhindre forekomsten af ​​PCR-produktkontamination.

Anbefalinger: Etablering af et rimeligt PCR-laboratorium, opretholdelse af et godt PCR-miljø, formulering af standard PCR-driftsprocedurer og opdyrkning af forsøgsledernes strenge driftsbevidsthed er nøglerne til at forhindre eller reducere forureningen af ​​PCR-eksperimenter.