Følgende analyse af mulige problemer iBuccalvatpind/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Rensningssøjlen er tilstoppet

I dette kit, i den genomiske DNA-ekstraktionsoperation, adsorberes rensningssøjlen direkte på prøvens enzymatiske lysisblanding uden centrifugeringstrin, og rensningssøjlen kan være blokeret på grund af ufuldstændig enzymisering og høj viskositet af prøven.

Følgende mulige årsager er som følger:

1. Ufuldstændig enzymatisk fordøjelse af vævsprøver.

Anbefaling: Prøvebehandlingstiden for Foregene Protease kan forlænges passende, eller supernatanten kan tages efter centrifugering ved 12.000 rpm (~13.400× g) i 5 min.

2. Overdreven brug af vævsprøver eller store væv.

Anbefaling: Det er bedst ikke at overstige 1Buccal vatpind i prøven;hvis prøven er for stor, øges doseringen af ​​buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 tilsvarende.

3. Prøvens viskositet er for høj.

Anbefaling: Prøver kan passende fortyndes med 10 mM Tris-HCl før genomisk DNA-ekstraktion.

4. Fragmenter af blodkortet er blevet suget.

Anbefaling: Den forbigående centrifugeringstid i trin 6 af blodplet (FTA-kort) genomisk ekstraktion kan forlænges passende.

Lavt udbytte eller intet DNA

Der er ofte en række faktorer, der påvirker genomisk DNA-udbytte, herunder prøveoprindelse, prøveopbevaringsbetingelser, prøveforberedelse, manipulation osv.

Genomisk DNA kan ikke opnås under ekstraktion

De mulige årsager er som følger:

1. Ukorrekt opbevaring af prøver eller opbevaring i for lang tid fører til genomisk DNA-nedbrydning.

Anbefaling: Orale podninger bør helst udtages friske, og det er ikke tilrådeligt at bruge konserverede podninger til genomiske DNA-ekstraktionsoperationer;blodpletprøver skal sikre, at kvaliteten er kvalificeret, og opbevaringstiden bør ikke være for lang.

2. For lidt vævsbrug kan resultere i ingen ekstraktion af det tilsvarende genomiske DNA.

Anbefaling: Følgbuccal prøvetagningsinstruktioner for podning i operationsvejledningen, og tør så mange gange som muligt, så nok celler kan fastgøres til den orale podning til genomisk DNA-ekstraktion;til ekstraktion af blodpletter kan skæreområdet for blodplet øges passende.

3. Foregene Protease er ukorrekt konserveret, hvilket resulterer i et fald i dens aktivitet eller inaktivering.

Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne forForegene Protease eller udskift den med en ny Foregene Protease til enzymatisk reaktion.

4. Ukorrekt opbevaring af sættet eller opbevaringstiden er for lang, hvilket resulterer i svigt af nogle komponenter i sættet.

Anbefaling: Køb en nyBuccal svaber DNAisolation kit til relaterede procedurer.

5. Buffer WB tilsætter ikke absolut ethanol.

Anbefaling: Bekræft, at buffer WB tilføjer den korrekte mængde absolut ethanol.

6. Eluenten er ikke tilsat korrekt til silikonefilmen.

Anbefaling: Tilføj 65°Cforvarmet eluent falder til midten af ​​silikonemembranen og lad stå ved stuetemperatur i 5 minutter for at øge elueringseffektiviteten.

Low-yield genomisk DNA isoleret

Følgende mulige årsager er som følger:

1. Ukorrekt opbevaring af prøver eller opbevaring i for lang tid fører til genomisk DNA-nedbrydning.

Anbefaling: Orale podninger udtages fortrinsvis friske, og konserverede podninger bør ikke anvendes til genomisk DNA-ekstraktion.

2. Hvis mængden af ​​vævsprøve er for lille, vil det ekstraherede genomiske DNA-indhold være mindre.

Anbefaling: Følg instruktionerne til prøvetagning af mundvab i betjeningsvejledningen, og tør så mange gange som muligt, så nok celler kan fastgøres til den mundtlige podning til genomisk DNA-ekstraktion.

3. Foregene Protease er ukorrekt konserveret, hvilket resulterer i et fald i dens aktivitet eller inaktivering.

Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne forthe Foregene Protease eller udskift den med en ny Foregene Protease til enzymatisk reaktion.

4. Elueringsproblemer.

Anbefaling: Brug buffer EB til eluering;hvis du bruger ddH₂O eller andre eluenter, bekræfter, at pH-værdien af ​​eluatet er mellem 7,0-8,5.

5. Eluatet tilsættes ikke korrekt dråbevist.

Anbefaling: Tilsæt eluentdråber til midten af ​​silikonemembranen og lad stå ved stuetemperatur i 5 minutter for at øge elueringseffektiviteten.

6. Elueringsvæsken akkumuleres for lidt.

Anbefaling: Brug eluent til genomisk DNA-eluering som påkrævet i instruktionerne, mindstintet mindre end 15μl.

Låh renhed of genomisk DNAisoleret

Lav genomisk DNA-renhed kan føre til fejl eller utilfredsstillende resultater af downstream-eksperimenter, såsom: enzymer kan ikke skæres op, PCR kan ikke få genfragmentet af interesse osv.

De mulige årsager er som følger:

1. Heteroproteinforurening, RNA-forurening.

Analyse: Oprensningssøjlen blev ikke vasket under anvendelse af buffer PW;Buffer PW-vaskerensningskolonnen blev ikke vasket med den korrekte centrifugalhastighed.

Anbefaling: Sørg for, at der ikke er udfældning i supernatanten, før der tilsættes ethanol;sørg for at vaske rensekolonnen i henhold til instruktionerne, og dette trin kan ikke udelades.

2. Urenhed ionforurening.

Analyse: Puffer WB vaskeoprensningskolonne blev udeladt eller vasket kun én gang, hvilket resulterede i resterende ionisk kontaminering.

Anbefaling: Sørg for at vaske Buffer WB 2 gange som anvist for at fjerne resterende ioner så meget som muligt.

3. RNA-enzymkontamination.

Analyse: Fremmede RNaser blev tilsat til buffer;Buffer PW-vaskeoperationen var forkert, hvilket resulterede i RNase-rester, hvilket påvirker nedstrøms RNA-eksperimentelle operationer, såsom in vitro-transkription.

Anbefaling: Foregene series nukleinsyreisolation kits kan fjerne RNA uden yderligere tilsætning af RNase,dermed bukkal podning/FTA-kort DNA-isoleringssætnødvendig't tilføje RNase;Sørg for at følge instruktionerne for Buffer PW-vaskerensningskolonnen, og dette trin kan ikke udelades.

4. Ethanolrest.

Analyse: Buffer WB udførte ikke centrifugering med tomme rør efter vask af oprensningskolonnen.

Anbefaling: Udfør den korrekte centrifugering af tomme rør i henhold til instruktionerne.

5. Anden urenhedsforurening.

Analyse: Gemte prøver eller specialprøver forbehandles ikke.

Anbefaling: Forbehandl prøven grundigt som anvist.