Viral RNA-isoleringskit til viral RNA-rensning fra plasma, serum og andre prøver
Kitbeskrivelse:
Kat.nr. RE-02011/02014
Til oprensning af viralt RNA fra plasma, serum, cellefri kropsvæsker, cellekultursupernatanter.
Isoler og oprens hurtigt viralt RNA fra prøver såsom plasma, serum, cellefri kropsvæsker og cellekultursupernatanter.
-Ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning.Hele sættet er RNase-frit
-Simpelt - alle operationer udføres ved stuetemperatur
-Hurtig—drift kan fuldføres på 20 minutter
-Højt RNA-udbytte: RNA-kun kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA
-Sikker - ingen organisk reagens brugt
-Stor prøvebehandlingskapacitet - op til 200 μl prøver kan behandles hver gang.
-Høj kvalitet - det oprensede RNA er meget rent, fri for protein og andre urenheder og kan opfylde forskellige nedstrøms eksperimentelle applikationer.
Beskrivelser
Sættet bruger spin-søjlen og formlen udviklet af Foregene, som effektivt kan udvinde viralt RNA af høj renhed og høj kvalitet fra prøver som plasma, serum, cellefri kropsvæske og cellekultursupernatant.Sættet tilføjer specifikt Lineær Acrylamid, som nemt kan fange små mængder RNA fra prøverne.RNA-Only Column kan effektivt binde RNA.Sættet kan behandle et stort antal prøver på samme tid.
Hele kittet indeholder ikke RNase, så det oprensede RNA vil ikke blive nedbrudt.Buffer viRW1 og Buffer viRW2 kan sikre, at den opnåede virale nukleinsyre er fri for protein, nuklease eller andre urenheder, som kan bruges direkte til nedstrøms molekylærbiologiske eksperimenter.
specifikationer
50 forberedelser, 200 forberedelser
Sættets komponenter
| Lineær acrylamid |
| Buffer viRL |
| Buffer viRW1, Buffer viRW2 |
| RNase-fri ddH2O |
| RNA-Kun kolonne |
| Instruktioner |
Egenskaber og fordele
-Ingen grund til at bekymre sig om RNA-nedbrydning.Hele sættet er RNase-frit
-Simpelt - alle operationer udføres ved stuetemperatur
-Hurtig—drift kan fuldføres på 20 minutter
-Højt RNA-udbytte: RNA-kun kolonne og unik formel kan effektivt rense RNA
-Sikker - ingen organisk reagens brugt
-Stor prøvebehandlingskapacitet - op til 200 μl prøver kan behandles hver gang.
-Høj kvalitet - det oprensede RNA er meget rent, fri for protein og andre urenheder og kan opfylde forskellige nedstrøms eksperimentelle applikationer.
Sættets parametre
Anvendelse af kit:
Det er velegnet til ekstraktion og oprensning af viralt RNA i prøver som plasma, serum, cellefri kropsvæske og cellekultursupernatant.
Workflow
Opbevaringsforhold
- Sættet kan opbevares i 24 måneder ved stuetemperatur (15-25 ℃), eller 2-8 ℃ i længere tid.
-Lineær acrylamidopløsning kan opbevares ved stuetemperatur i 7 dage.Når du har modtaget sættet, skal du tage Linear Acrylamid-opløsning ud og opbevare den ved -20 ℃.
- Efter tilføjelse af lineær acrylamid til buffer viRL kan den opbevares ved 2-8 ℃ i op til 48 timer.Brug venligst den frisklavede opløsning.
Vejledninger til problemanalyse
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Intet RNA kan ekstraheres, eller udbyttet af nukleinsyre er lavt
Der er normalt mange faktorer, der påvirker genvindingseffektiviteten, såsom: prøve-RNA-indhold, driftsmetode, elueringsvolumen osv..
Analyse af almindelige årsager:
1.Isbad eller lavtemperatur (4 °C) centrifugering under drift.
Forslag: Rumtemperatur (15-25 ° C) drift, aldrig isbad og lav temperatur centrifuge.
2. Forkert prøveopbevaring eller prøveopbevaring i for lang tid.
Forslag: Opbevar prøver ved -80 ° C eller frys i flydende nitrogen, og undgå gentagen fryse-optøning brug;prøv at bruge frisk indsamlede prøver til RNA-ekstraktion.
3.Utilstrækkelig prøvelysering
Anbefaling: Sørg for, at prøven og arbejdsopløsningen (lineær acrylamid) er blevet grundigt blandet og inkuberet i 10 minutter ved stuetemperatur (15-25 ° C)
4. Eluenten blev tilsat forkert
Anbefaling: Sørg for, at RNase-Free ddH2O tilsættes til midten af membranen i rensekolonnen
5. Forkert volumen vandfri ethanol i buffer viRW2
Forslag: Følg instruktionerne, tilsæt den korrekte mængde vandfri ethanol til Buffer viRW2 og bland dem godt, før du bruger sættet.
6.Ukorrekt prøvebrug.
Forslag: 200 µl prøve pr. 500 µl buffer viRL.For stort prøvevolumen vil resultere i reduceret RNA-ekstraktionshastighed.
7. Forkert elueringsvolumen eller ufuldstændig eluering.
Forslag: Rensningskolonnens eluentvolumen er 30-50μl;hvis elueringseffekten ikke er tilfredsstillende, anbefales det at tilføje forvarmet RNase-fri ddH2O og forlænge tiden ved at placere ved stuetemperatur, såsom 5-10 min
8. Oprensningskolonnen har ethanolrester efter skylning i Buffer viRW2.
Forslag: Hvis der stadig er ethanol tilbage efter skylning i buffer viRW2 og centrifugering med tomme rør i 2 minutter, kan rensekolonnen efterlades ved stuetemperatur i 5 minutter efter centrifugering med tomme rør for fuldstændigt at fjerne resterende ethanol.
Nedbrydningen af oprensede RNA-molekyler
Kvaliteten af det oprensede RNA er relateret til faktorer som prøveopbevaring, RNase-kontamination og drift.
Analyse af almindelige årsager:
1.De indsamlede prøver blev ikke gemt i tide.
Forslag: Hvis prøven ikke bruges i tide efter indsamling, skal den opbevares ved -80 ℃ eller flydende nitrogen med det samme.Til ekstraktion af RNA-molekyler, prøv at bruge frisk indsamlede prøver, når det er muligt.
2. Indsamlede prøver blev nedfryset og optøet gentagne gange.
Forslag: Undgå gentagen frysning og optøning (ikke mere end én gang) under prøvetagning og opbevaring, ellers vil udbyttet af nukleinsyre falde.
3.RNase blev indført på operationsstuen, eller der blev ikke brugt engangshandsker, masker osv..
Forslag: Eksperimentet med ekstraktion af RNA-molekyler udføres bedst i et separat RNA-operationsrum, og forsøgsbordet rengøres før forsøget.Bær engangshandsker og -masker under eksperimentet for at undgå RNA-nedbrydning forårsaget af RNase-introduktion.
4.Reagenset er kontamineret med RNase under brugen.
Forslag: Udskift med nyt viralt RNA-isoleringskit til relaterede eksperimenter.
5. RNase-kontaminationen af centrifugerørene, pipettespidserne osv. Forslag: Sørg for, at centrifugerørene, pipettespidserne og pipetterne alle er RNase-frie.
De oprensede RNA-molekyler påvirkede nedstrøms eksperimenter
RNA-molekylerne oprenset af oprensningssøjlen vil påvirke nedstrøms eksperimenter, hvis der er for mange saltioner eller proteiner, såsom: omvendt transkription, Northern Blot osv.。
1.Der er resterende saltioner i de eluerede RNA-molekyler.
Anbefaling: Sørg for, at den korrekte mængde vandfri ethanol er tilsat Buffer viRW2, og vask rensekolonnen to gange i henhold til den korrekte centrifugeringshastighed i betjeningsvejledningen. Hvis der stadig er saltioner tilbage, kan du tilføje Buffer viRW2 til rensekolonnen og lade den stå ved stuetemperatur i 5 min.Udfør derefter centrifugering for at fjerne forurening af saltioner i størst muligt omfang
2.Der er ethanol tilbage i de eluerede RNA-molekyler
Forslag: Når du har bekræftet, at rensningskolonner er blevet skyllet af Buffer viRW2, skal du udføre tomrørscentrifugering i henhold til centrifugalhastigheden i betjeningsvejledningen.Hvis der stadig er ethanol tilbage, kan den efterlades i 5 minutter ved stuetemperatur efter en centrifugering med tomme rør for at fjerne den resterende ethanol i størst muligt omfang.
Instruktionsmanualer:
Instruktionsmanual til viralt RNA-isoleringskit
