Plante-DNA-isoleringskit Genomisk plante-DNA-oprensningssæt Reagensprotokol
specifikationer
50 forberedelser, 100 forberedelser, 250 forberedelser
Dette sæt bruger en søjle, der kun består af DNA, der specifikt kan binde DNA, Foregene-protease og et unikt buffersystem, som i høj grad forenkler oprensningen af plantegenomisk DNA.Genomisk DNA af høj kvalitet kan opnås inden for 30 minutter, hvilket undgår nedbrydning af genomisk DNA.
Den DNA-kun silicagel-membran, der bruges i spin-søjlen, er Foregenes unikke nye materiale, som effektivt og specifikt kan binde til DNA og maksimere fjernelse af RNA, urenhedsproteiner, ioner, polysaccharider, polyphenoler og andre organiske forbindelser.
Produktkomponenter
| Buffer PL1, Buffer PL2 |
| Buffer PW, Buffer WB, Buffer EB |
| Foregene Protease |
| Kun DNA-kolonne |
| Instruktioner |
Egenskaber og fordele
■ Ingen RNase-kontamination: Den DNA-only-søjle, der leveres af sættet, gør det muligt at fjerne RNA fra genomisk DNA uden yderligere RNase under eksperimentet, hvilket forhindrer laboratoriet i at blive kontamineret med eksogen RNase.
■ Hurtig hastighed: Foregene Protease har højere aktivitet end tilsvarende proteaser og fordøjer vævsprøver hurtigere.
■ Enkelt: Den genomiske DNA-ekstraktionsoperation kan fuldføres på 30 minutter.
■ Praktisk: Centrifugeringen udføres ved stuetemperatur, ingen 4℃ lavtemperaturcentrifugering eller ethanoludfældning af DNA er påkrævet.
■ Sikkerhed: der kræves ingen organisk reagens.
■ Høj kvalitet: Det oprensede genomiske DNA har store fragmenter, ingen RNA, ingen RNase og ekstremt lavt ionindhold, kan opfylde kravene i forskellige eksperimenter.
Kit ansøgning
Velegnet til ekstraktion og oprensning af genomisk DNA fra friske eller frosne plantevæv.
Workflow
Diagram
Opbevaring og holdbarhed
Sættet kan opbevares i 12 måneder ved stuetemperatur (15–25 ℃) og 2–8 ℃ i længere tid.
Foregene Protease Plus opløsning har en unik formel, som er aktiv, når den opbevares ved stuetemperatur i lang tid (3 måneder);dens aktivitet og stabilitet vil være bedre, når den opbevares kl4℃, så det anbefales at opbevare det ved 4℃, husk ikke at opbevare det ved -20℃.
Vejledning til problemanalyse
The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.
Lavt udbytte eller intet DNA
Der er normalt mange faktorer, der påvirker udbyttet af genomisk DNA, herunder prøvens kilde, prøvens alder, prøvens opbevaringsbetingelser og operationen.
Genomisk DNA kunne ikke opnås under ekstraktion
1. Vævsprøverne opbevares forkert eller opbevares for længe, hvilket resulterer i nedbrydning af det genomiske DNA.
Anbefaling: Opbevar vævsprøver i flydende nitrogen eller -20°C;prøv at bruge nyligt indsamlede prøver til genomisk DNA-ekstraktion.
2. For lidt prøvemængde kan forårsage, at det tilsvarende genomiske DNA ikke ekstraheres.
Forslag: For vævsprøver, der har været opbevaret i lang tid eller har alvorlig genomisk DNA-nedbrydning, kan mængden af vævsprøver øges passende for at ekstrahere betydeligt genomisk DNA.Mængden af prøven kan bestemmes i henhold til DNA-behovet, men den friske prøve bør ikke overstige 100 mg, og den tørre prøve bør ikke overstige 30 mg.
3. Prøven er ikke formalet med flydende nitrogen eller placeret for længe efter flydende nitrogen.
Forslag: Under DNA-ekstraktion skal prøven formales fuldstændigt med flydende nitrogen for at bryde cellevæggen;Efter formaling skal du overføre prøvepulveret til PL1 forvarmet til 65°C så hurtigt som muligt (når det formalede pulver er smeltet, vil det genomiske DNA begynde at nedbrydes hurtigt).
4. Forkert opbevaring af Foregene Protease resulterer i reduceret eller inaktiveret aktivitet.
Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne for Foregene Protease eller udskift den med en ny Foregene Protease til enzymatisk hydrolyse.
5. Sættet er forkert opbevaret eller opbevaret for længe, hvilket får nogle komponenter i sættet til at svigte.
Anbefaling: Køb et nyt plantegenomisk DNA-ekstraktionssæt til relaterede operationer.
6. Forkert brug af sættet.
Forslag: Køb et plante-DNA-isoleringskit dedikeret til prøver til ekstraktion og oprensning af plantegenomisk DNA.
7. Buffer WB uden at tilføje envandfri ethanol.
Anbefaling: Sørg for at tilføje den korrekte mængde absolut ethanol til buffer WB.
8. Eluenten blev ikke dryppet korrekt på silicamembranen.
Forslag: Tilsæt den forvarmede eluent ved 65°C℃dråbevis til midten af silicagelmembranen, og lad den stå ved stuetemperatur i 5 minutter for at øge elueringseffektiviteten.
Ekstraktion for at opnå lavt-udbytte genomisk DNA
1. Prøven opbevares forkert eller opbevares for længe, hvilket resulterer i nedbrydning af genomisk DNA.
Anbefaling: Opbevar vævsprøver ved -20℃;prøv at bruge nyligt indsamlede vævsprøver til genomisk DNA-ekstraktion.
2. Hvis mængden af vævsprøver er for lille, vil det ekstraherede genomiske DNA være mindre.
Forslag: Nogle planteprøver er rige på vand, såsom vandplanter som alger osv., doseringen kan øges passende eller vandet kan dehydreres lidt før operationen.
3. Prøverne blev ikke formalet grundigt med flydende nitrogen eller blev efterladt ved stuetemperatur for længe efter formaling.
Forslag: Den flydende nitrogenformaling skal være tilstrækkelig, og prøvecellevæggen skal brydes så meget som muligt;umiddelbart efter formaling skal prøvepulveret overføres til 65℃forvarmet buffer PL1 til næste trin.
4. Bruger ikke det korrekte sæt.
Anbefaling: Brug et dedikeret plante-DNA-isoleringskit til at ekstrahere og rense plantegenomisk DNA.
5. Forkert opbevaring af Foregene Protease resulterer i reduceret eller inaktiveret aktivitet.
Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne for Foregene Protease eller udskift den med en ny Foregene Protease til enzymatisk hydrolyse.
6. Elueringsproblem
Anbefaling: Brug venligst buffer EB til eluering;hvis du bruger ddH2O eller andre eluenter, sørg for, at eluentens pH er mellem 7,0-8,5.
7. Eluenten dryppes ikke korrekt
Forslag: Tilføj venligst elueringsdråben til midten af silicamembranen og lad den stå ved stuetemperatur i 5 minutter for at øge elueringseffektiviteten.
8. Elueringsvolumenet er for lille
Forslag: Brug venligst eluenten til genomisk DNA-eluering i henhold til instruktionerne, i det mindste ikke mindre end 100μl.
Ekstraheret genomisk DNA med lav renhed
Den lave renhed af genomisk DNA vil føre til svigt eller ringe effekt af nedstrøms eksperimenter, såsom: enzymet kan ikke skæres, og målgenfragmentet kan ikke opnås ved PCR.
1. Diverse proteinkontamination, RNA-kontamination.
Analyse: Buffer PW blev ikke brugt til at vaske søjlen;Buffer PW blev ikke brugt til at vaske søjlen ved den korrekte centrifugeringshastighed.
Forslag: forsøg at sikre, at der ikke er nogen udfældning i supernatanten, når supernatanten ledes gennem kolonnen;sørg for at vaske rensekolonnen med Buffer PW i henhold til instruktionerne, og dette trin kan ikke udelades.
2. Urenhed ionforurening.
Analyse: Buffer WB-vaskesøjlen blev udeladt eller kun vasket én gang, hvilket resulterede i resterende ionisk kontaminering.
Anbefaling: Sørg for at vaske to gange med Buffer WB i henhold til instruktionerne for at fjerne resterende ioner så meget som muligt.
3. RNase-kontamination.
Analyse: Eksogen RNase tilsættes til bufferen;ukorrekt vaskeoperation i buffer PW vil resultere i resterende RNase og påvirke nedstrøms RNA eksperimentelle operationer, såsom in vitro transkription.
Forslag: Foregene-seriens nukleinsyreekstraktionssæt kan fjerne RNA uden yderligere RNase, og alle reagenser i Plant DNA Isolation Kit behøver ikke RNase;sørg for at vaske rensekolonnen med Buffer PW i henhold til instruktionerne, og dette trin kan ikke udelades.
4. Ethanolrester.
Analyse: Efter vask af oprensningssøjlen med buffer WB blev der ikke udført centrifugering med tomme rør.
Anbefaling: Følg instruktionerne for korrekt centrifugering af tomme rør.
Instruktionsmanual:
Instruktionsmanual til plante-DNA-isoleringssæt
