Etabler PCR-eksperiment-SOP for at standardisere eksperimentpersonalets adfærd.
Eksperimentatoren overholder strengt driftsprocedurerne og minimerer PCR-forurening, der kan være forårsaget af menneskelige faktorer eller forhindrer forekomsten af forurening.Derudover skal forsøgslederen have den tilsvarende faglige viden og færdigheder, herunder færdigheder i at betjene relateret udstyr, afklare hele arbejdsprocessen, beherske behandlingsmetoderne for kontaminering og laboratoriekvalitetskontrolmetoder og være i stand til at fortolke testresultaterne korrekt.
Etabler et standard PCR-laboratorium.
PCR-laboratoriet er i princippet opdelt i fire områder, nemlig reagensforberedelsesområde, prøvebehandlingsområde, amplifikationsområde og amplifikationsproduktanalyseområde.De to første områder er præ-amplifikationsområder, og de to sidste områder er post-amplifikationsområder.Pre-amplifikationszonen og post-amplifikationszonen bør være strengt adskilt.Eksperimentelle materialer, reagenser, registreringspapir, penne, rengøringsmaterialer osv. kan kun flyde fra præ-amplifikationsområdet til post-amplifikationsområdet, det vil sige fra reagensforberedelsesområde → prøvebehandlingsområde → amplifikationsområde → amplifikationsproduktanalyseområde, og må ikke flyde baglæns.Luftstrømmen i laboratoriet bør også strømme fra præ-amplifikationsområdet til post-amplifikationsområdet og ikke strømme baglæns.Det ideelle PCR-laboratoriedesign er vist nedenfor:
Figur A: Ideel PCR-laboratorieopsætningstilstand med undertryk i bufferrummet
Figur B: Ideel PCR-laboratorieopsætningstilstand med positivt tryk i bufferrummet
PCR-laboratorieopsætningsdiagrammerne givet i figur A og figur B bør være en mere ideel opsætningstilstand, og laboratoriet med betingelser kan henvise til denne tilstand for design.For almindelige laboratorier anbefales det, at PCR-amplifikationsområdet og produktanalyseområdet kan adskilles, og åbningen af låget skal reduceres så meget som muligt i prøveforberedelsesområdet og PCR-amplifikationsområdet.Husk: Produkter og eksperimentelle forsyninger i produktanalyseområdet er strengt forbudt at tage til prøveforberedelsesområdet og PCR-amplifikationsområdet.
Hvis laboratoriet kun udfører PCR-detektion og -identifikation, anbefales det at bruge fluorescerende kvantitativ PCR i stedet for konventionel PCR.
Fluorescens kvantitative PCR-detektionsresultater kan indsamles og analyseres ved hjælp af fluorescenssignaler, så der er ingen grund til at åbne låget for elektroforese efter reaktionen, hvilket undgår PCR-produktforurening forårsaget af lækage af reaktionsprodukter til dannelse af aerosoler.Hvis du øger antallet af hætteåbninger under påfyldningstrinnet af gelelektroforese, vil der sandsynligvis forekomme aerosolkontamination.Det anbefales at fremme anvendelsen af kvantitativ PCR og gradvist erstatte kvalitativ PCR.
UNG anti-PCR-produktkontamineringssystem bruges til PCR-reaktionen.
Systemet bruger dUTP i stedet for dTTP.Efter PCR-reaktionen inkorporeres alle PCR-produkter (DNA-fragmenter) med dUTP;i den næste runde af PCR-reaktion inkuberes UNG-enzymet tilsat til systemet ved 37°C i 5 minutter før PCR, som specifikt kan nedbryde alle DNA-fragmenter indeholdende dUTP, og derefter udføre PCR-reaktion.Dette kan fuldstændig fjerne aerosolforureningen forårsaget af PCR-produkter.Effekten er vist i figuren nedenfor:
Bemærk: For den direkte PCR-serie kan du vælge serieprodukterne fra Foregenes anti-PCR-produktkontamineringssystemAntyder
For laboratorier, der udfører genotypetestning i stor skala, anbefales det kraftigt at bruge UNG anti-PCR-produktkontamineringssystem til test af reagenser ud over konstruktionen af rimelige laboratorier.
Påmindelse: Brugen af dette system kan ikke fjerne PCR-produktkontaminationen, der allerede er forårsaget.Derfor bør UNG-systemet bruges i begyndelsen af den relevante test, og UNG-systemet bør bruges til PCR-amplifikation for at forhindre kontaminering af PCR-produkter Falsk positiv.
Det anbefales at bruge Direct PCR-UNG-systemet fra Foregene, når der udføres test i stor skala, såsom:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Denne serie af sæt fra Foregenekan ikke kun udføre PCR-detektion hurtigt og i stor skala, men også effektivt forebygge og kontrollere PCR-produktkontamination.
Posttid: 19-mars-2021
