W:Bror, den omvendte transkription er afsluttet, og til sidst det sidste trin – fluorescerende kvantitativ PCR!Hej, bror, hvad er real-time kvantitativ PCR?
M:PCR ved du altid, ikke?
W: Du ved, PCR er polymerasekædereaktionen, og det er en teknologi, der øger DNA!
M:Det er næsten... Det er en teknisk metode til at amplificere målsekvensen til mere end en million gange gennem specifikke primere, men dette indikerer kun tilstedeværelsen eller fraværet af målsekvensen og kan ikke bestemme mængden af ​​den indledende skabelon.Fluorescens kvantitativ PCR er en teknisk metode udviklet til at løse dette problem.Realtids-PCR og mængde-PCR (qPCR) refererer generelt til det.
W: Forskellen fra almindelig PCR ligger i fluorescens kvantificering?
M: Ja, det vil sige, i forlængelsesstadiet af hver PCR-cyklus, detekteres fluorescenssignalintensiteten, og den indledende skabelonmængde kan beregnes i overensstemmelse med ændringen af ​​signalintensiteten.
W: Det føles så kompliceret!Skal jeg selv regne det ud?
M: Dette kræver, at du lærer langsomt, det er bedst at kunne forstå princippet.Nu kan du først fokusere på CT-værdien, som er relativt intuitive eksperimentelle data, og dens størrelse svarer til størrelsen af ​​den oprindelige skabelonmængde.Der er også grafer som amplifikationskurver og smeltekurver.De har det sidste ord om, hvorvidt dit eksperiment er vellykket eller ej.
W: Åh, bror.Så skal jeg lave qPCR-eksperimentet!
M: Vær særlig opmærksom på ikke at tilføje skabeloner til reagensområdet, ellers vil din ubrugte blanding let blive forurenet!
W: Forstår det!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Højere effektivitet, større specificitet
Høj følsomhed, god kompatibilitet