Buccal podning/FTA-kort DNA-isoleringskit Genomisk DNA-ekstraktion eller oprensningskit fra bukkale podninger
Kitbeskrivelse:
Rens hurtigt genomisk DNA af høj kvalitet fra prøver af mundvab/FTA-kort.
◮Ingen RNase-kontamination:Den DNA-Only Column, der leveres af sættet, gør det muligt at fjerne RNA'et fra det genomiske DNA uden at tilføje RNase under eksperimentet, hvilket forhindrer laboratoriet i at blive kontamineret med eksogen RNase.
◮Hurtig hastighed:Foregene Protease har højere aktivitet end lignende proteaser og fordøjer vævsprøver hurtigt;operationen er enkel, og den genomiske DNA-ekstraktionsoperation kan gennemføres inden for 20-80 minutter.
◮Praktisk:Centrifugeringen udføres ved stuetemperatur, og der er ikke behov for 4°C lavtemperaturcentrifugering eller ethanoludfældning af DNA.
◮Sikkerhed:Der kræves ingen organisk reagensekstraktion.
◮Høj kvalitet:Det ekstraherede genomiske DNA har store fragmenter, ingen RNA, ingen RNase og ekstremt lavt ionindhold, som kan opfylde kravene i forskellige eksperimenter.
◮Mikroelueringssystem:Det kan øge koncentrationen af genomisk DNA, hvilket er praktisk til nedstrøms påvisning eller eksperiment.
Beskrivelse
Dette kit giver en effektiv og hurtig metode til at opnå højkoncentrationsgenomisk DNA fra mundprøver og FTA-kort (blodpletter).Bruger vores virksomhed's unikke DNA-kun silica membran spin kolonne og formel, kombineret med Foregene Protease, høj koncentration, høj kvalitet genomisk DNA kan ekstraheres på 80 minutter.Den specialdesignede lille rensesøjle binder genomisk DNA, og DNA'et kan elueres med en lille mængde (15 μl) elueringssystem for at øge koncentrationen af det opnåede genomiske DNA, hvilket er praktisk til nedstrøms påvisning eller eksperiment.Sættet kan behandle en eller flere prøver ad gangen, og rensningsprocessen kræver ikke ekstraktion af organiske stoffer som phenol, chloroform og tidskrævende isopropanol- eller ethanoludfældning, og operationen er enkel og tidsbesparende.
specifikationer
50 forberedelser
Sættets komponenter
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Lineær acrylamid |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| Kun DNA-kolonne |
| Instruktioner |
Egenskaber og fordele
-Ingen RNase-kontamination: Den DNA-only-søjle, der leveres af sættet, gør det muligt at fjerne RNA fra genomisk DNA uden at tilføje RNase under eksperimentet, hvilket undgår, at laboratoriet bliver kontamineret med eksogen RNase.
-Hurtig hastighed: Foregene Protease har højere aktivitet end lignende proteaser, fordøjer prøver hurtigt;enkel betjening.
-Bekvemt: Centrifugeringen udføres ved stuetemperatur, og der er ikke behov for 4°C lavtemperaturcentrifugering eller ethanoludfældning af DNA.
-Sikkerhed: Ingen organisk reagensekstraktion er påkrævet.
-Høj kvalitet: Det ekstraherede genomiske DNA har store fragmenter, ingen RNA, ingen RNase og ekstremt lavt ionindhold, som kan opfylde kravene i forskellige eksperimenter.
-Mikro-elueringssystem: Det kan øge koncentrationen af genomisk DNA, hvilket er praktisk til nedstrøms påvisning eller eksperiment.
Kit ansøgning
Det er velegnet til oprensning af genomisk DNA fra følgende prøver: bukkale podninger, FTA-kort (blodpletter).
Opbevaring og holdbarhed
-Dette sæt kan opbevares i 12 måneder under tørre forhold ved stuetemperatur (15-25°C);skal den opbevares i længere tid, kan den opbevares ved 2-8°C.
Bemærk: Hvis opløsningen opbevares ved lav temperatur, er den tilbøjelig til nedbør.Før brug skal du sørge for at placere opløsningen i sættet ved stuetemperatur i en periode.Hvis det er nødvendigt, forvarm det i et 37°C vandbad i 10 minutter for at opløse bundfaldet, og bland det før brug.
-Foregene Protease-opløsning har en unik formel, som er aktiv, når den opbevares ved stuetemperatur i lang tid (3 måneder);dens aktivitet og stabilitet vil være bedre, når den opbevares ved 4°C, så det anbefales at opbevare den ved 4°C, husk ikke at opbevare den ved -20°C.
Rensningssøjlen er tilstoppet
I dette kit, i den genomiske DNA-ekstraktionsoperation, adsorberes rensningssøjlen direkte på prøvens enzymatiske lysisblanding uden centrifugeringstrin, og rensningssøjlen kan være blokeret på grund af ufuldstændig enzymisering og høj viskositet af prøven.
Følgende mulige årsager er som følger:
1. Ufuldstændig enzymatisk fordøjelse af vævsprøver.
Anbefaling: Prøvebehandlingstiden for Foregene Protease kan forlænges passende, eller supernatanten kan tages efter centrifugering ved 12.000 rpm (~13.400 × g) i 5 min.
2. Overdreven brug af vævsprøver eller store væv.
Anbefaling: Det er bedst ikke at overstige 1 bukkal podning i prøven;hvis prøven er for stor, øges doseringen af buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 tilsvarende.
3. Prøvens viskositet er for høj.
Anbefaling: Prøver kan passende fortyndes med 10 mM Tris-HCl før genomisk DNA-ekstraktion.
4. Fragmenter af blodkortet er blevet suget.
Anbefaling: Den forbigående centrifugeringstid i trin 6 af blodplet (FTA-kort) genomisk ekstraktion kan forlænges passende.
Lavt udbytte eller intet DNA
Der er ofte en række faktorer, der påvirker genomisk DNA-udbytte, herunder prøveoprindelse, prøveopbevaringsbetingelser, prøveforberedelse, manipulation osv.
Genomisk DNA kan ikke opnås under ekstraktion
De mulige årsager er som følger:
1. Ukorrekt opbevaring af prøver eller opbevaring i for lang tid fører til genomisk DNA-nedbrydning.
Anbefaling: Orale podninger bør helst udtages friske, og det er ikke tilrådeligt at bruge konserverede podninger til genomiske DNA-ekstraktionsoperationer;blodpletprøver skal sikre, at kvaliteten er kvalificeret, og opbevaringstiden bør ikke være for lang.
2. For lidt vævsbrug kan resultere i ingen ekstraktion af det tilsvarende genomiske DNA.
Anbefaling: Følg instruktionerne for prøvetagning af mundpodning i betjeningsvejledningen, og tør så mange gange som muligt, så nok celler kan fastgøres til den orale podning til genomisk DNA-ekstraktion;til ekstraktion af blodpletter kan skæreområdet for blodplet øges passende.
3. Foregene Protease er ukorrekt konserveret, hvilket resulterer i et fald i dens aktivitet eller inaktivering.
Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne for Foregene Protease eller udskift den med en ny Foregene Protease til enzymatisk reaktion.
4. Ukorrekt opbevaring af sættet eller opbevaringstiden er for lang, hvilket resulterer i svigt af nogle komponenter i sættet.
Anbefaling: Køb et nyt Buccal podning DNA-isoleringskit til relaterede procedurer.
5. Buffer WB tilsætter ikke absolut ethanol.
Anbefaling: Bekræft, at buffer WB tilføjer den korrekte mængde absolut ethanol.
6. Eluenten er ikke tilsat korrekt til silikonefilmen.
Anbefaling: Tilsæt 65 °C forvarmede eluentdråber til midten af silikonemembranen og lad stå ved stuetemperatur i 5 minutter for at øge elueringseffektiviteten.
Lavt-udbytte genomisk DNA isoleret
Følgende mulige årsager er som følger:
1. Ukorrekt opbevaring af prøver eller opbevaring i for lang tid fører til genomisk DNA-nedbrydning.
Anbefaling: Orale podninger udtages fortrinsvis friske, og konserverede podninger bør ikke anvendes til genomisk DNA-ekstraktion.
2. Hvis mængden af vævsprøve er for lille, vil det ekstraherede genomiske DNA-indhold være mindre.
Anbefaling: Følg instruktionerne til prøvetagning af mundvab i betjeningsvejledningen, og tør så mange gange som muligt, så nok celler kan fastgøres til den mundtlige podning til genomisk DNA-ekstraktion.
3. Foregene Protease er ukorrekt konserveret, hvilket resulterer i et fald i dens aktivitet eller inaktivering.
Anbefaling: Bekræft opbevaringsbetingelserne for Foregene Protease eller udskift den med en ny Foregene Protease til enzymatisk reaktion.
4. Elueringsproblemer.
Anbefaling: Brug buffer EB til eluering;hvis du bruger ddH2O eller andre eluenter, bekræfter, at pH-værdien af eluatet er mellem 7,0-8,5.
5. Eluatet tilsættes ikke korrekt dråbevist.
Anbefaling: Tilsæt eluentdråber til midten af silikonemembranen og lad stå ved stuetemperatur i 5 minutter for at øge elueringseffektiviteten.
6. Elueringsvæsken akkumuleres for lidt.
Anbefaling: Brug eluent til genomisk DNA-eluering som påkrævet i instruktionerne, mindst ikke mindre end 15 μl.
Lav renhed af genomisk DNA isoleret
Lav genomisk DNA-renhed kan føre til fejl eller utilfredsstillende resultater af downstream-eksperimenter, såsom: enzymer kan ikke skæres op, PCR kan ikke få genfragmentet af interesse osv.
De mulige årsager er som følger:
1. Heteroproteinforurening, RNA-forurening.
Analyse: Oprensningssøjlen blev ikke vasket under anvendelse af buffer PW;Buffer PW-vaskerensningskolonnen blev ikke vasket med den korrekte centrifugalhastighed.
Anbefaling: Sørg for, at der ikke er udfældning i supernatanten, før der tilsættes ethanol;sørg for at vaske rensekolonnen i henhold til instruktionerne, og dette trin kan ikke udelades.
2. Urenhed ionforurening.
Analyse: Puffer WB vaskeoprensningskolonne blev udeladt eller vasket kun én gang, hvilket resulterede i resterende ionisk kontaminering.
Anbefaling: Sørg for at vaske Buffer WB 2 gange som anvist for at fjerne resterende ioner så meget som muligt.
3. RNA-enzymkontamination.
Analyse: Fremmede RNaser blev tilsat til buffer;Buffer PW-vaskeoperationen var forkert, hvilket resulterede i RNase-rester, hvilket påvirker nedstrøms RNA-eksperimentelle operationer, såsom in vitro-transkription.
Anbefaling: Foregene-seriens nukleinsyreisoleringskit kan fjerne RNA uden yderligere tilsætning af RNase, således behøver bukkal podning/FTA-kort DNA-isoleringskit ikke at tilføje RNase;Sørg for at følge instruktionerne for Buffer PW-vaskerensningskolonnen, og dette trin kan ikke udelades.
4. Ethanolrest.
Analyse: Buffer WB udførte ikke centrifugering med tomme rør efter vask af oprensningskolonnen.
Anbefaling: Udfør den korrekte centrifugering af tomme rør i henhold til instruktionerne.
5. Anden urenhedsforurening.
Analyse: Gemte prøver eller specialprøver forbehandles ikke.
Anbefaling: Forbehandl prøven grundigt som anvist.
